重组毕赤酵母表达系统构建

酵母表达系统包括酿酒酵母表达系统,甲醇酵母表达系统以及其他酵母表达系统。毕赤酵母属于甲醇营养型酵母,能够将甲醇作为唯一碳源。毕赤酵母表达系统的优势如下所述:

①拥有目前最强,调控机理最严格的启动子之一醇氧化酶基因AOX1启动子,非常利于外源基因的表达调控;

②具有翻译后的蛋白加工修饰功能例如磷酸化、糖基化等,是一种不可多得的集聚多种优势的真核表达系统;

③ 既可以在细胞内表达,也可在细胞外表达;

④培养基成本低廉,培养条件简单,生长繁殖速度迅速;

⑤外源基因可以单拷贝或者多拷贝的形式在特定的位点整合进酵母染色体上,伴随着染色体的复制而复制,有较高的遗传稳定性,同酿酒酵母一样以稳定的表达菌株存在;

⑥可以进行大规模发酵,适合高密度培养,非常适合重组真核蛋白的工业放大化生产制备。

毕赤酵母宿主菌常用的菌株类型有四种,分别是X33、GS115、KM71H、SMD1163/8。其中X33是野生型菌株,而GS115和KM71H两种,都具有His4营养缺陷标记。GS115 菌株具有AOX1基因,属于Mut+,指的是甲醇利用正常型;KM71 H菌株的AOX1位点被ARG4基因插入,属于Muts,指甲醇利用缓慢型,两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。SMD116(his4 pep4)属于蛋白酶缺失型菌株,它能够表达一些由于蛋白降解而引起的的表达产物分布不均的问题。只是由于SMD116(his4 pep4)菌株生长缓慢,导致表达的外源蛋白质产量低。

服务内容:
1、亚克隆:亚克隆至两个适当的表达载体中,制备大量质粒,构建线性化载体。
2、表达条件优化及评估:将线性载体转化至适合的寄主菌株中,通过PCR方法确定阳性转化株,表达条件优化及确认–确定培养基及诱导浓度,SDS-PAGE以及Western blot分析。
3、蛋白表达及纯化:少量表达,纯度达90%以上。
服务价格及周期:

服务编号 服务项目 服务周期
S2002-1 毕赤酵母表达载体的构建(参见基因克隆部分) 2-3周
S2002-2 毕赤酵母表达载体转化到宿主菌 2-4周
S2002-3 蛋白表达条件的优化 2-3周
S2002-4 蛋白表达及纯化(85%纯度的蛋白200ug) 2-3周

载体选择:

编号 载体名称 载体抗性 表达菌 表达类型
BCJM-001 pPICzaA 博来霉素 GS115/X33等 诱导表达
BCJM-002 pPICzA 博来霉素 GS115/X33等 诱导表达
BCJM-003 其他

服务承诺:
1、基因合成和载体构建参见相关服务部分。
2、本公司会在最短的时间内快速完成实验,并为客户提供足量蛋白以满足科研需求。
3、提供完整的实验报告。
4、提供合乎客户要求量和纯度的特定蛋白。

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