重组腺相关病毒包装

腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）属于微小病毒科( parvovirus)，为无包膜的单链线状 DNA 病毒。AAV的基因组约4700bp，包括上下游两个开放读码框架(ORF)，位于分别由145核苷酸组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。由于腺相关病毒具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点，已被广泛地应用于基础研究和临床试验中，并且腺相关病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

AAV特点：

1 安全性高：迄今从未发现野生型AAV 对人体致病，重组 AAV 基因组序列上去除了大部分的野生型 AAV 基因组元件，进一步保证了安全性；
2 免疫原性低：AAV2的基因组仅 4681 个核苷酸，便于用常规的重组 DNA技术进行操作，而且进行动物实验时造成的免疫反应小；
3 宿主范围广：能感染分裂细胞和非分裂细胞；
4 表达稳定：能介导基因的长期稳定表达；
5 物理性质稳定：在60℃不能被灭活，能抗氯仿。

rAAV包装纯化及滴度检测：

AAV包装过程中，包装质粒负责编码目的基因以及两个末端反向重复序列（ITR，对于病毒的复制和包装具有决定性作用），辅助质粒包含AAV包装所需的cap（编码病毒衣壳蛋白）和rep（参与病毒的复制）基因，以及腺相关病毒Helper质粒。三种质粒共同转染293T细胞后，AAV病毒开始复制和包装。腺相关病毒的生产，采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化，并通过qPCR对病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下rAAV的滴度在10¹²~10¹³ VG/ml，完全可以满足各类整体实验的使用要求。

AAV载体不同血清型

研究发现 AAV 具有多种血清型，各种不同血清型的 AAV 载体的主要区别是衣壳蛋白不同，因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。目前爱科博生物在包装腺相关病毒时有9种不同的 AAV 血清型可供客户选择，建议客户针对不同组织器官选择相应血清型的 AAV 病毒，见下表。

AAV组织特异性启动子

rAAV载体应用案例

以上为已经发表文章成功案例的推荐剂量。

重组腺相关病毒包装案例

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