重组腺病毒包装服务

重组腺病毒(AdV)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。

感染范围广
腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外,还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。

感染效率高
因腺病毒的感染不依赖细胞周期,可感染悬浮细胞、原代细胞等。腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。

载体容量大
腺病毒的载体容量较大,最高可达8kb。

腺病毒滴度检测
滴度检测方法:定量PCR检测病毒基因组中外源DNA拷贝数。
滴度检测原理:腺相关病毒的基因组为单链DNA,外源DNA拷贝数代表病毒基因组拷贝数。

病毒滴度高
腺病毒的滴度可高达1011PFU/ml,可用于动物水平的实验。

较好的生物安全性
腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中,实验中虽然会有一定机率出现RCA(即复制型腺病毒),但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体,所以一般危害不大。

腺病毒载体优势

① 表达快,腺病毒感染细胞后,1-2天即可表达
② 载体容量大,感染效率高,常用于感染难感染的细胞
③ 不整合到染色体中,无插入致突变性
④  具有嗜肝性,易于感染肝细胞,腺病毒的体内应用是用于感染肝脏
不过由于腺病毒免疫原性高,对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症,体内应用需谨慎。

腺病毒产品与服务

编号 调控方式 载体名称 滴度 荧光标记 启动子
ADV-01 过表达 pDC316 1010PFU/ml mCMV
ADV-02 过表达 pDC316-mCMV-EGFP 1010PFU/ml EGFP mCMV
ADV-03 干扰 pDC316-ZsGreen-shRNA 1010PFU/ml ZsGreen U6
ADV-04 双干扰 pDC316-H1-U6-shRNA2 1010PFU/ml U6,H1

注射部位、注射剂量和观察时间

血清型 荧光 注射(观察)部位 病毒滴度 注射体积 检测时间
ADV5 EGFP 小鼠尾静脉(肝脏) 1E+10VG/mL 100ul 7-10天
ADV5 EGFP 小鼠尾静脉(肺脏) 1E+10VG/mL 100ul 7-10天
ADV5 EGFP 大鼠脑立体定位(大脑皮层) 1E+11 VG/mL 1.0ul 7天

以上为已经发表文章成功案例的推荐剂量。

重组腺病毒案例

发表评论

Your email address will not be published. Required fields are marked *