重组腺病毒包装服务

腺病毒(Adenovirus, ADV)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈,适于短时间内进行基因高表达的实验,与其它病毒相比,腺病毒优势在于插入片段较长,表达活性强。

重组腺病毒包装是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架,在克隆,包装,扩增等各步条件做了改进和优化,达到了克隆阳性率更高,质量更可靠,包装稳定,出毒迅速,滴度高等效果。在此基础上,还拓展了更广泛的应用,可以提供各种带报告基因的,带不同标签的腺病毒构建和包装服务。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导,基因转位,Co-IP,干细胞研究等科研实验。并且可以完成较高难度的克隆构建,包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建,在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。

体外应用时,腺病毒载体转基因效率高(接近100%的转导效率),且可转导不同类型的细胞,对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是,在体内应用时,由于腺病毒免疫原性强,感染剧烈,故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应,对动物体征和实验结果的客观性造成影响。

腺病毒包装与纯化

由于腺病毒骨架载体比较大(~30kb),而且载体中的一些常用酶切位点几乎都有多个,如果用常规的酶切-连接的方式将外源基因或者shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上,成功率很低,因此,腺病毒表达系统基本上都是用同源重组的方法将外源基因或shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上。

腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞,待细胞出现CPE状态后通过收集细胞上清和细胞裂解物,通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。 CPE(Cytopathic Effect):病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性,利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒载体优势

腺病毒(Adenovirus)是最高效可靠的重组病毒表达系统之一,可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。

其具备以下优点:

  1. 宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外,还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。
  2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期,故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。
  3. 腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。
  4. 病毒滴度高,可用于动物水平的实验。
  5. 有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中;实验中虽然会有一定机率出现RCA(即复制型腺病毒),但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体,所以一般危害不大。

重组腺病毒、腺相关病毒和慢病毒比较

载体选择

以下腺病毒载体可供您选择:

服务价格:

客户须知:

1、  本服务是基于客户提供构建好了穿梭载体的基础上的价格,如果需要进行腺病毒载体的构建:价格参见载体构建部分。

2、  腺病毒的感染依赖于细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体(CAR),虽然其可以感染多种宿主及大量的细胞株/系,仍有少量细胞因其表达不带该受体而无法进行有效感染,客户在确定是否采用重组腺病毒之前请先通过阅读文献或是预实验来确定实验的目标细胞可被腺病毒感染。

3、  如客户所需包装的目的基因或shRNA序列片段由客户提供,则客户应提供所要构建腺病毒的目的基因/shRNA的序列及其它相关说明信息。客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

4、 若包装的重组腺病毒用于表达shRNA,可直接购买本公司shRNA真核表达载体构建的shRNA表达质粒作为穿梭载体,直接包装腺病毒,特别适用于质粒转染效率较低的目的细胞。

服务承诺:

1、  提供腺病毒包装、扩增,纯化,滴定。如果需要提供腺病毒载体的构建,将目的基因片段克隆到腺病毒载体上,参见相关部分。

2、  默认情况下本公司提供的病毒量为200ulx5支,滴度为1×1010pfu/ml ~2×1010pfu/ml(部分病毒可能因其插入片段本身的毒副作用而对重组腺病毒的滴度有所影响)。

3、  提供完整的实验报告、测序报告。

 

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