RT SuperMix with dsDNase

货号:A105-50

规格:50rxn

保存:-20℃避光保存两年

【产品概述】

RT SuperMix with dsDNase是将RNA逆转录成为cDNA更为简便的操作系统,含有第一链cDNA合成所需的所有试剂,只需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。合成的第一链cDNA可广泛用于文库构建、第二链合成、杂交、PCR扩增、RT-qPCR检测等。试剂盒中包含新一代的逆转录酶和优化的缓冲液,与普通逆转录酶系统相比,具有逆转录能力强(合成较多全长cDNA)、无RNase H活性、热稳定性高和半衰期长等优点。该逆转录酶产物得率更高,获得的cDNA片段更长,模板使用范围更广等特点。5×Reaction Mix包含逆转录反应所需的缓冲液,dNTPs及优化的逆转录引物,Supreme Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase,Ribonuclease Inhibitor和dsDNase,以简化加样步骤。试剂盒中含有的新型dsDNase,能够特异性去除双链DNA,而不消化RNA样品、逆转录引物及合成的cDNA,并且具有热敏感性,可在55℃快速不可逆失活,实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。

【第一链cDNA合成】

  1. 在RNase-free离心管中配制如下混合液,轻轻混匀以下成分:
Component Volume
10 pg-5 μg Total RNA or 10 pg-500 ng mRNA*1 As Required
DEPC-treated Water up to 13 μl
5×Reaction Mix*2 4 μl
Supreme Enzyme Mix 3 μl

*1:为保证逆转录成功,请使用高质量RNA模板。

*25×Reaction Mix在使用前需充分混匀。

  1. 按照下表所示进行逆转录反应:
Temperature Time Note
25℃ 10 min 随机引物与RNA模板配对及去除基因组DNA
55℃ 15 min 逆转录反应及dsDNase快速灭活
85℃ 5 min 逆转录酶灭活
  1. 产物可立即用于PCR或qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。

【注意事项】

防止RNase污染:操作时需穿戴手套、口罩和工作服,实验用的耗材均需保证RNase-free。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的合格产品。 在所有情况下,本公司对此产品所承担的责任,仅限于此产品的价值本身。

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