枯草芽孢杆菌表达系统构建

枯草芽孢杆菌表达系统与其他表达系统相比,优势在于表达宿主本身的非致病性;表达的蛋白不混有内毒素;没有密码子偏爱性可以改为没有明显的偏爱密码子;并且拥有一套高效的分泌信号肽及分子伴侣系统,而且在多数情况下,芽孢杆菌分泌的真核来源的重组蛋白具有天然构象和生物活性,避免形成包涵体;表达周期短,蛋白产率高。

目前用芽孢杆菌系统成功表达的真核基因产物有白介素-3(IL-3)、乙肝核心抗原、乙肝PreS2抗原、丙肝病毒壳蛋白、HIV p4Ispf-1蛋白等;成功表达的原核基因产物有甘油-3-磷酸脱氢酶、甘油激酶、纤维素酶、色氨酸合成酶等。

本公司可以根据客户需求进行载体改造和宿主菌改造,或者采用商业化的载体(pHT43载体,配套菌WB800或WB800N),可以提供胞内或胞外、组成型或诱导型的表达;可以提供GST、His、HA,Flag、myc、MBP等标签。

服务内容:
1、亚克隆:亚克隆至两个适当的表达载体中,制备大量质粒,构建线性化载体。
2、表达条件优化及评估:将线性载体转化至适合的寄主菌株中,通过PCR方法确定阳性转化株,表达条件优化及确认——确定培养基及诱导浓度,SDS-PAGE以及Western blot分析。
3、蛋白表达及纯化:少量表达,纯度达90%以上。
服务价格及周期:

服务编号 服务项目 服务周期
S2002-1 蛋白枯草芽孢表达载体的构建(参见基因克隆部分) 2-3周
S2002-2 蛋白枯草芽孢杆菌表达载体转化到宿主菌 2-4周
S2002-3 蛋白表达条件的优化 2-3周
S2002-4 蛋白表达及纯化(85%纯度的蛋白200ug ) 1周

载体选择:

编号 载体名称 载体抗性 表达菌 表达类型
1 pWB980-ori 卡那 WB600 组成型表达
2 pP43NMK 氨卞 BS168/WB800等 组成型表达
3 pHT43 氨卞/氯霉素 BS168/WB800等 诱导表达
4 其他

服务承诺:
1、基因合成和载体构建参见相关服务部分。
2、本公司会在最短的时间内快速完成实验,并为客户提供足量蛋白以满足科研需求。
3、提供完整的实验报告。
4、提供合乎客户要求量和纯度的特定蛋白。

 

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