pNZ8148

The pNZ8148 vector contains an origin of replication (ORI), the gene for the resistance to chloramphenicol, two genes for the replication proteins repA and repC, the nisin-inducible promoter (P nisA), and the transcription terminator (T). The gene, tagged with a Strep-tag II (STREP) followed by a stop codon (*), can be inserted between the necessary NcoI site and another endonuclease site from the multicloning site (MCS) such as PstI, SphI, KpnI, SpeI, XbaI, SacI and HindIII.

The replicons of the vectors pNZ8008, pNZ8148, pNZ8149 and pNZ8150 are identical and came originally from the Lactococcus lactis plasmid pSH71. However, this replicon has a broad host range. Plasmids with this replicon can replicate in many Gram-positive bacteria, such as Lactobacillus plantarum and Streptococcus thermophilus.

pNZ8148 – In this vector the nisA promoter is followed by an NcoI site for translational fusions at the ATG. It contains a terminator after the MCS. Sequence adaptation for cloning in NcoI can result in a change in the second amino acid of a protein (Mierau and Kleerebezem, 2005).

0001 AGATCTAGTC TTATAACTAT ACTGACAATA GAAACATTAA CAAATCTAAA ACAGTCTTAA 
0061 TTCTATCTTG AGAAAGTATT GGTAATAATA TTATTGTCGA TAACGCGAGC ATAATAAACG 
0121 GCTCTGATTA AATTCTGAAG TTTGTTAGAT ACAATGATTT CGTTCGAAGG AACTACAAAA 
0181 TAAATTATAA GGAGGCACTC ACCATGGGTA CTGCAGGCAT GCGGTACCAC TAGTTCTAGA 
0241 GAGCTCAAGC TTTCTTTGAA CCAAAATTAG AAAACCAAGG CTTGAAACGT TCAATTGAAA 
0301 TGGCAATTAA ACAAATTACA GCACGTGTTG CTTTGATTGA TAGCCAAAAA GCAGCAGTTG 
0361 ATAAAGCAAT TACTGATATT GCTGAAAAAT TGTAATTTAT AAATAAAAAT CACCTTTTAG 
0421 AGGTGGTTTT TTTATTTATA AATTATTCGT TTGATTTCGC TTTCGATAGA ACAATCAAAT 
0481 CGTTTCTGAG ACGTTTTAGC GTTTATTTCG TTTAGTTATC GGCATAATCG TTAAAACAGG 
0541 CGTTATCGTA GCGTAAAAGC CCTTGAGCGT AGCGTGGCTT TGCAGCGAAG ATGTTGTCTG 
0601 TTAGATTATG AAAGCCGATG ACTGAATGAA ATAATAAGCG CAGCGTCCTT CTATTTCGGT 
0661 TGGAGGAGGC TCAAGGGAGT TTGAGGGAAT GAAATTCCCT CATGGGTTTG ATTTTAAAAA 
0721 TTGCTTGCAA TTTTGCCGAG CGGTAGCGCT GGAAAATTTT TGAAAAAAAT TTGGAATTTG 
0781 GAAAAAAATG GGGGGAAAGG AAGCGAATTT TGCTTCCGTA CTACGACCCC CCATTAAGTG 
0841 CCGAGTGCCA ATTTTTGTGC CAAAAACGCT CTATCCCAAC TGGCTCAAGG GTTTGAGGGG 
0901 TTTTTCAATC GCCAACGAAT CGCCAACGTT TTCGCCAACG TTTTTTATAA ATCTATATTT 
0961 AAGTAGCTTT ATTTTTGTTT TTATGATTAC AAAGTGATAC ACTAATTTTA TAAAATTATT 
1021 TGATTGGAGT TTTTTAAATG GTGATTTCAG AATCGAAAAA AAGAGTTATG ATTTCTCTGA 
1081 CAAAAGAGCA AGATAAAAAA TTAACAGATA TGGCGAAACA AAAAGATTTT TCAAAATCTG 
1141 CGGTTGCGGC GTTAGCTATA GAAGAATATG CAAGAAAGGA ATCAGAACAA AAAAAATAAG 
1201 CGAAAGCTCG CGTTTTTAGA AGGATACGAG TTTTCGCTAC TTGTTTTTGA TAAGGTAATT 
1261 ATATCATGGC TATTAAAAAT ACTAAAGCTA GAAATTTTGG ATTTTTATTA TATCCTGACT 
1321 CAATTCCTAA TGATTGGAAA GAAAAATTAG AGAGTTTGGG CGTATCTATG GCTGTCAGTC 
1381 CTTTACACGA TATGGACGAA AAAAAAGATA AAGATACATG GAATAGTAGT GATGTTATAC 
1441 GAAATGGAAA GCACTATAAA AAACCACACT ATCACGTTAT ATATATTGCA CGAAATCCTG 
1501 TAACAATAGA AAGCGTTAGG AACAAGATTA AGCGAAAATT GGGGAATAGT TCAGTTGCTC 
1561 ATGTTGAGAT ACTTGATTAT ATCAAAGGTT CATATGAATA TTTGACTCAT GAATCAAAGG 
1621 ACGCTATTGC TAAGAATAAA CATATATACG ACAAAAAAGA TATTTTGAAC ATTAATGATT 
1681 TTGATATTGA CCGCTATATA ACACTTGATG AAAGCCAAAA AAGAGAATTG AAGAATTTAC 
1741 TTTTAGATAT AGTGGATGAC TATAATTTGG TAAATACAAA AGATTTAATG GCTTTTATTC 
1801 GCCTTAGGGG AGCGGAGTTT GGAATTTTAA ATACGAATGA TGTAAAAGAT ATTGTTTCAA 
1861 CAAACTCTAG CGCCTTTAGA TTATGGTTTG AGGGCAATTA TCAGTGTGGA TATAGAGCAA 
1921 GTTATGCAAA GGTTCTTGAT GCTGAAACGG GGGAAATAAA ATGACAAACA AAGAAAAAGA 
1981 GTTATTTGCT GAAAATGAGG AATTAAAAAA AGAAATTAAG GACTTAAAAG AGCGTATTGA 
2041 AAGATACAGA GAAATGGAAG TTGAATTAAG TACAACAATA GATTTATTGA GAGGAGGGAT 
2101 TATTGAATAA ATAAAAGCCC CCCTGACGAA AGTCGACGGC AATAGTTACC CTTATTATCA 
2161 AGATAAGAAA GAAAAGGATT TTTCGCTACG CTCAAATCCT TTAAAAAAAC ACAAAAGACC 
2221 ACATTTTTTA ATGTGGTCTT TTATTCTTCA ACTAAAGCAC CCATTAGTTC AACAAACGAA 
2281 AATTGGATAA AGTGGGATAT TTTTAAAATA TATATTTATG TTACAGTAAT ATTGACTTTT 
2341 AAAAAAGGAT TGATTCTAAT GAAGAAAGCA GACAAGTAAG CCTCCTAAAT TCACTTTAGA 
2401 TAAAAATTTA GGAGGCATAT CAAATGAACT TTAATAAAAT TGATTTAGAC AATTGGAAGA 
2461 GAAAAGAGAT ATTTAATCAT TATTTGAACC AACAAACGAC TTTTAGTATA ACCACAGAAA 
2521 TTGATATTAG TGTTTTATAC CGAAACATAA AACAAGAAGG ATATAAATTT TACCCTGCAT 
2581 TTATTTTCTT AGTGACAAGG GTGATAAACT CAAATACAGC TTTTAGAACT GGTTACAATA 
2641 GCGACGGAGA GTTAGGTTAT TGGGATAAGT TAGAGCCACT TTATACAATT TTTGATGGTG 
2701 TATCTAAAAC ATTCTCTGGT ATTTGGACTC CTGTAAAGAA TGACTTCAAA GAGTTTTATG 
2761 ATTTATACCT TTCTGATGTA GAGAAATATA ATGGTTCGGG GAAATTGTTT CCCAAAACAC 
2821 CTATACCTGA AAATGCTTTT TCTCTTTCTA TTATTCCTTG GACTTCATTT ACTGGGTTTA 
2881 ACTTAAATAT CAATAATAAT AGTAATTACC TTCTACCCAT TATTACAGCA GGAAAATTCA 
2941 TTAATAAAGG TAATTCAATA TATTTACCGC TATCTTTACA GGTACATCAT TCTGTTTGTG 
3001 ATGGTTATCA TGCTGGATTG TTTATGAACT CTATTCAGGA ATTGTCAGAT AGGCCTAATG 
3061 ACTGGCTTTT ATAATATGAG ATAATGCCGA CTGTACTTTT TACAGTCGGT TTTCTAATGT 
3121 CACTAACCTG CCCCGTTAGT TGAAGAAGGT TTTTATATTA CAGCTCC