pHIL-D2

pHIL-D2载体的详细信息如下：
? pHIL-D2载体大小8,210 bp，是融合表达载体。
? 载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为EcoR I.
? 胞内表达蛋白基因。
? 在载体构建过程中，需要在基因上添加起始密码子ATG。
? 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
? 为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
?为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型) ?将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。

0001 AGATCGCGGC CGCGATCTAA CATCCAAAGA CGAAAGGTTG AATGAAACCT TTTTGCCATC 
0061 CGACATCCAC AGGTCCATTC TCACACATAA GTGCCAAACG CAACAGGAGG GGATACACTA 
0121 GCAGCAGACC GTTGCAAACG CAGGACCTCC ACTCCTCTTC TCCTCAACAC CCACTTTTGC 
0181 CATCGAAAAA CCAGCCCAGT TATTGGGCTT GATTGGAGCT CGCTCATTCC AATTCCTTCT 
0241 ATTAGGCTAC TAACACCATG ACTTTATTAG CCTGTCTATC CTGGCCCCCC TGGCGAGGTC 
0301 ATGTTTGTTT ATTTCCGAAT GCAACAAGCT CCGCATTACA CCCGAACATC ACTCCAGATG 
0361 AGGGCTTTCT GAGTGTGGGG TCAAATAGTT TCATGTTCCC AAATGGCCCA AAACTGACAG 
0421 TTTAAACGCT GTCTTGGAAC CTAATATGAC AAAAGCGTGA TCTCATCCAA GATGAACTAA 
0481 GTTTGGTTCG TTGAAATGCT AACGGCCAGT TGGTCAAAAA GAAACTTCCA AAAGTCGCCA 
0541 TACCGTTTGT CTTGTTTGGT ATTGATTGAC GAATGCTCAA AAATAATCTC ATTAATGCTT 
0601 AGCGCAGTCT CTCTATCGCT TCTGAACCCG GTGGCACCTG TGCCGAAACG CAAATGGGGA 
0661 AACAACCCGC TTTTTGGATG ATTATGCATT GTCCTCCACA TTGTATGCTT CCAAGATTCT 
0721 GGTGGGAATA CTGCTGATAG CCTAACGTTC ATGATCAAAA TTTAACTGTT CTAACCCCTA 
0781 CTTGACAGGC AATATATAAA CAGAAGGAAG CTGCCCTGTC TTAAACCTTT TTTTTTATCA 
0841 TCATTATTAG CTTACTTTCA TAATTGCGAC TGGTTCCAAT TGACAAGCTT TTGATTTTAA 
0901 CGACTTTTAA CGACAACTTG AGAAGATCAA AAAACAACTA ATTATTCGAA ACGAGGAATT 
0961 CGCCTTAGAC ATGACTGTTC CTCAGTTCAA GTTGGGCACT TACGAGAAGA CCGGTCTTGC 
1021 TAGATTCTAA TCAAGAGGAT GTCAGAATGC CATTTGCCTG AGAGATGCAG GCTTCATTTT 
1081 TGATACTTTT TTATTTGTAA CCTATATAGT ATAGGATTTT TTTTGTCATT TTGTTTCTTC 
1141 TCGTACGAGC TTGCTCCTGA TCAGCCTATC TCGCAGCTGA TGAATATCTT GTGGTAGGGG 
1201 TTTGGGAAAA TCATTCGAGT TTGATGTTTT TCTTGGTATT TCCCACTCCT CTTCAGAGTA 
1261 CAGAAGATTA AGTGAGAAGT TCGTTTGTGC AAGCTTATCG ATAAGCTTTA ATGCGGTAGT 
1321 TTATCACAGT TAAATTGCTA ACGCAGTCAG GCACCGTGTA TGAAATCTAA CAATGCGCTC 
1381 ATCGTCATCC TCGGCACCGT CACCCTGGAT GCTGTAGGCA TAGGCTTGGT TATGCCGGTA 
1441 CTGCCGGGCC TCTTGCGGGA TATCGTCCAT TCCGACAGCA TCGCCAGTCA CTATGGCGTG 
1501 CTGCTAGCGC TATATGCGTT GATGCAATTT CTATGCGCAC CCGTTCTCGG AGCACTGTCC 
1561 GACCGCTTTG GCCGCCGCCC AGTCCTGCTC GCTTCGCTAC TTGGAGCCAC TATCGACTAC 
1621 GCGATCATGG CGACCACACC CGTCCTGTGG ATCTATCGAA TCTAAATGTA AGTTAAAATC 
1681 TCTAAATAAT TAAATAAGTC CCAGTTTCTC CATACGAACC TTAACAGCAT TGCGGTGAGC 
1741 ATCTAGACCT TCAACAGCAG CCAGATCCAT CACTGCTTGG CCAATATGTT TCAGTCCCTC 
1801 AGGAGTTACG TCTTGTGAAG TGATGAACTT CTGGAAGGTT GCAGTGTTAA CTCCGCTGTA 
1861 TTGACGGGCA TATCCGTACG TTGGCAAAGT GTGGTTGGTA CCGGAGGAGT AATCTCCACA 
1921 ACTCTCTGGA GAGTAGGCAC CAACAAACAC AGATCCAGCG TGTTGTACTT GATCAACATA 
1981 AGAAGAAGCA TTCTCGATTT GCAGGATCAA GTGTTCAGGA GCGTACTGAT TGGACATTTC 
2041 CAAAGCCTGC TCGTAGGTTG CAACCGATAG GGTTGTAGAG TGTGCAATAC ACTTGCGTAC 
2101 AATTTCAACC CTTGGCAACT GCACAGCTTG GTTGTGAACA GCATCTTCAA TTCTGGCAAG 
2161 CTCCTTGTCT GTCATATCGA CAGCCAACAG AATCACCTGG GAATCAATAC CATGTTCAGC 
2221 TTGAGACAGA AGGTCTGAGG CAACGAAATC TGGATCAGCG TATTTATCAG CAATAACTAG 
2281 AACTTCAGAA GGCCCAGCAG GCATGTCAAT ACTACACAGG GCTGATGTGT CATTTTGAAC 
2341 CATCATCTTG GCAGCAGTAA CGAACTGGTT TCCTGGACCA AATATTTTGT CACACTTAGG 
2401 AACAGTTTCT GTTCCGTAAG CCATAGCAGC TACTGCCTGG GCGCCTCCTG CTAGCACGAT 
2461 ACACTTAGCA CCAACCTTGT GGGCAACGTA GATGACTTCT GGGGTAAGGG TACCATCCTT 
2521 CTTAGGTGGA GATGCAAAAA CAATTTCTTT GCAACCAGCA ACTTTGGCAG GAACACCCAG 
2581 CATCAGGGAA GTGGAAGGCA GAATTGCGGT TCCACCAGGA ATATAGAGGC CAACTTTCTC 
2641 AATAGGTCTT GCAAAACGAG AGCAGACTAC ACCAGGGCAA GTCTCAACTT GCAACGTCTC 
2701 CGTTAGTTGA GCTTCATGGA ATTTCCTGAC GTTATCTATA GAGAGATCAA TGGCTCTCTT 
2761 AACGTTATCT GGCAATTGCA TAAGTTCCTC TGGGAAAGGA GCTTCTAACA CAGGTGTCTT 
2821 CAAAGCGACT CCATCAAACT TGGCAGTTAG TTCTAAAAGG GCTTTGTCAC CATTTTGACG 
2881 AACATTGTCG ACAATTGGTT TGACTAATTC CATAATCTGT TCCGTTTTCT GGATAGGACG 
2941 ACGAAGGGCA TCTTCAATTT CTTGTGAGGA GGCCTTAGAA ACGTCAATTT TGCACAATTC 
3001 AATACGACCT TCAGAAGGGA CTTCTTTAGG TTTGGATTCT TCTTTAGGTT GTTCCTTGGT 
3061 GTATCCTGGC TTGGCATCTC CTTTCCTTCT AGTGACCTTT AGGGACTTCA TATCCAGGTT 
3121 TCTCTCCACC TCGTCCAACG TCACACCGTA CTTGGCACAT CTAACTAATG CAAAATAAAA 
3181 TAAGTCAGCA CATTCCCAGG CTATATCTTC CTTGGATTTA GCTTCTGCAA GTTCATCAGC 
3241 TTCCTCCCTA ATTTTAGCGT TCAACAAAAC TTCGTCGTCA AATAACCGTT TGGTATAAGA 
3301 ACCTTCTGGA GCATTGCTCT TACGATCCCA CAAGGTGGCT TCCATGGCTC TAAGACCCTT 
3361 TGATTGGCCA AAACAGGAAG TGCGTTCCAA GTGACAGAAA CCAACACCTG TTTGTTCAAC 
3421 CACAAATTTC AAGCAGTCTC CATCACAATC CAATTCGATA CCCAGCAACT TTTGAGTTGC 
3481 TCCAGATGTA GCACCTTTAT ACCACAAACC GTGACGACGA GATTGGTAGA CTCCAGTTTG 
3541 TGTCCTTATA GCCTCCGGAA TAGACTTTTT GGACGAGTAC ACCAGGCCCA ACGAGTAATT 
3601 AGAAGAGTCA GCCACCAAAG TAGTGAATAG ACCATCGGGG CGGTCAGTAG TCAAAGACGC 
3661 CAACAAAATT TCACTGACAG GGAACTTTTT GACATCTTCA GAAAGTTCGT ATTCAGTAGT 
3721 CAATTGCCGA GCATCAATAA TGGGGATTAT ACCAGAAGCA ACAGTGGAAG TCACATCTAC 
3781 CAACTTTGCG GTCTCAGAAA AAGCATAAAC AGTTCTACTA CCGCCATTAG TGAAACTTTT 
3841 CAAATCGCCC AGTGGAGAAG AAAAAGGCAC AGCGATACTA GCATTAGCGG GCAAGGATGC 
3901 AACTTTATCA ACCAGGGTCC TATAGATAAC CCTAGCGCCT GGGATCATCC TTTGGACAAC 
3961 TCTTTCTGCC AAATCTAGGT CCAAAATCAC TTCATTGATA CCATTATTGT ACAACTTGAG 
4021 CAAGTTGTCG ATCAGCTCCT CAAATTGGTC CTCTGTAACG GATGACTCAA CTTGCACATT 
4081 AACTTGAAGC TCAGTCGATT GAGTGAACTT GATCAGGTTG TGCAGCTGGT CAGCAGCATA 
4141 GGGAAACACG GCTTTTCCTA CCAAACTCAA GGAATTATCA AACTCTGCAA CACTTGCGTA 
4201 TGCAGGTAGC AAGGGAAATG TCATACTTGA AGTCGGACAG TGAGTGTAGT CTTGAGAAAT 
4261 TCTGAAGCCG TATTTTTATT ATCAGTGAGT CAGTCATCAG GAGATCCTCT ACGCCGGACG 
4321 CATCGTGGCC GGCATCACCG GCGCCACAGG TGCGGTTGCT GGCGCCTATA TCGCCGACAT 
4381 CACCGATGGG GAAGATCGGG CTCGCCACTT CGGGCTCATG AGCGCTTGTT TCGGCGTGGG 
4441 TATGGTGGCA GGCCCCGTGG CCGGGGGACT GTTGGGCGCC ATCTCCTTGC ATGCACCATT 
4501 CCTTGCGGCG GCGGTGCTCA ACGGCCTCAA CCTACTACTG GGCTGCTTCC TAATGCAGGA 
4561 GTCGCATAAG GGAGAGCGTC GAGTATCTAT GATTGGAAGT ATGGGAATGG TGATACCCGC 
4621 ATTCTTCAGT GTCTTGAGGT CTCCTATCAG ATTATGCCCA ACTAAAGCAA CCGGAGGAGG 
4681 AGATTTCATG GTAAATTTCT CTGACTTTTG GTCATCAGTA GACTCGAACT GTGAGACTAT 
4741 CTCGGTTATG ACAGCAGAAA TGTCCTTCTT GGAGACAGTA AATGAAGTCC CACCAATAAA 
4801 GAAATCCTTG TTATCAGGAA CAAACTTCTT GTTTCGAACT TTTTCGGTGC CTTGAACTAT 
4861 AAAATGTAGA GTGGATATGT CGGGTAGGAA TGGAGCGGGC AAATGCTTAC CTTCTGGACC 
4921 TTCAAGAGGT ATGTAGGGTT TGTAGATACT GATGCCAACT TCAGTGACAA CGTTGCTATT 
4981 TCGTTCAAAC CATTCCGAAT CCAGAGAAAT CAAAGTTGTT TGTCTACTAT TGATCCAAGC 
5041 CAGTGCGGTC TTGAAACTGA CAATAGTGTG CTCGTGTTTT GAGGTCATCT TTGTATGAAT 
5101 AAATCTAGTC TTTGATCTAA ATAATCTTGA CGAGCCAAGG CGATAAATAC CCAAATCTAA 
5161 AACTCTTTTA AAACGTTAAA AGGACAAGTA TGTCTGCCTG TATTAAACCC CAAATCAGCT 
5221 CGTAGTCTGA TCCTCATCAA CTTGAGGGGC ACTATCTTGT TTTAGAGAAA TTTGCGGAGA 
5281 TGCGATATCG AGAAAAAGGT ACGCTGATTT TAAACGTGAA ATTTATCTCA AGATCGCGGC 
5341 CGCGATCTCG AATAATAACT GTTATTTTTC AGTGTTCCCG ATCTGCGTCT ATTTCACAAT 
5401 ACCAACATGA GTCAGCTTAT CGATGATAAG CTGTCAAACA TGAGAATTAA TTCGATGATA 
5461 AGCTGTCAAA CATGAGAAAT CTTGAAGACG AAAGGGCCTC GTGATACGCC TATTTTTATA 
5521 GGTTAATGTC ATGATAATAA TGGTTTCTTA GACGTCAGGT GGCACTTTTC GGGGAAATGT 
5581 GCGCGGAACC CCTATTTGTT TATTTTTCTA AATACATTCA AATATGTATC CGCTCATGAG 
5641 ACAATAACCC TGATAAATGC TTCAATAATA TTGAAAAAGG AAGAGTATGA GTATTCAACA 
5701 TTTCCGTGTC GCCCTTATTC CCTTTTTTGC GGCATTTTGC CTTCCTGTTT TTGCTCACCC 
5761 AGAAACGCTG GTGAAAGTAA AAGATGCTGA AGATCAGTTG GGTGCACGAG TGGGTTACAT 
5821 CGAACTGGAT CTCAACAGCG GTAAGATCCT TGAGAGTTTT CGCCCCGAAG AACGTTTTCC 
5881 AATGATGAGC ACTTTTAAAG TTCTGCTATG TGGCGCGGTA TTATCCCGTG TTGACGCCGG 
5941 GCAAGAGCAA CTCGGTCGCC GCATACACTA TTCTCAGAAT GACTTGGTTG AGTACTCACC 
6001 AGTCACAGAA AAGCATCTTA CGGATGGCAT GACAGTAAGA GAATTATGCA GTGCTGCCAT 
6061 AACCATGAGT GATAACACTG CGGCCAACTT ACTTCTGACA ACGATCGGAG GACCGAAGGA 
6121 GCTAACCGCT TTTTTGCACA ACATGGGGGA TCATGTAACT CGCCTTGATC GTTGGGAACC 
6181 GGAGCTGAAT GAAGCCATAC CAAACGACGA GCGTGACACC ACGATGCCTG CAGCAATGGC 
6241 AACAACGTTG CGCAAACTAT TAACTGGCGA ACTACTTACT CTAGCTTCCC GGCAACAATT 
6301 AATAGACTGG ATGGAGGCGG ATAAAGTTGC AGGACCACTT CTGCGCTCGG CCCTTCCGGC 
6361 TGGCTGGTTT ATTGCTGATA AATCTGGAGC CGGTGAGCGT GGGTCTCGCG GTATCATTGC 
6421 AGCACTGGGG CCAGATGGTA AGCCCTCCCG TATCGTAGTT ATCTACACGA CGGGGAGTCA 
6481 GGCAACTATG GATGAACGAA ATAGACAGAT CGCTGAGATA GGTGCCTCAC TGATTAAGCA 
6541 TTGGTAACTG TCAGACCAAG TTTACTCATA TATACTTTAG ATTGATTTAA ATTGTAAACG 
6601 TTAATATTTT GTTAAAATTC GCGTTAAATT TTTGTTAAAT CAGCTCATTT TTTAACCAAT 
6661 AGGCCGAAAT CGGCAAAATC CCTTATAAAT CAAAAGAATA GACCGAGATA GGGTTGAGTG 
6721 TTGTTCCAGT TTGGAACAAG AGTCCACTAT TAAAGAACGT GGACTCCAAC GTCAAAGGGC 
6781 GAAAAACCGT CTATCAGGGC GATGGCCCAC TACGTGAACC ATCACCCTAA TCAAGTTTTT 
6841 TGGGGTCGAG GTGCCGTAAA GCACTAAATC GGAACCCTAA AGGGAGCCCC CGATTTAGAG 
6901 CTTGACGGGG AAAGCCGGCG AACGTGGCGA GAAAGGAAGG GAAGAAAGCG AAAGGAGCGG 
6961 GCGCTAGGGC GCTGGCAAGT GTAGCGGTCA CGCTGCGCGT AACCACCACA CCCGCCGCGC 
7021 TTAATGCGCC GCTACAGGGC GCGTAAAAGG ATCTAGGTGA AGATCCTTTT TGATAATCTC 
7081 ATGACCAAAA TCCCTTAACG TGAGTTTTCG TTCCACTGAG CGTCAGACCC CGTAGAAAAG 
7141 ATCAAAGGAT CTTCTTGAGA TCCTTTTTTT CTGCGCGTAA TCTGCTGCTT GCAAACAAAA 
7201 AAACCACCGC TACCAGCGGT GGTTTGTTTG CCGGATCAAG AGCTACCAAC TCTTTTTCCG 
7261 AAGGTAACTG GCTTCAGCAG AGCGCAGATA CCAAATACTG TCCTTCTAGT GTAGCCGTAG 
7321 TTAGGCCACC ACTTCAAGAA CTCTGTAGCA CCGCCTACAT ACCTCGCTCT GCTAATCCTG 
7381 TTACCAGTGG CTGCTGCCAG TGGCGATAAG TCGTGTCTTA CCGGGTTGGA CTCAAGACGA 
7441 TAGTTACCGG ATAAGGCGCA GCGGTCGGGC TGAACGGGGG GTTCGTGCAC ACAGCCCAGC 
7501 TTGGAGCGAA CGACCTACAC CGAACTGAGA TACCTACAGC GTGAGCATTG AGAAAGCGCC 
7561 ACGCTTCCCG AAGGGAGAAA GGCGGACAGG TATCCGGTAA GCGGCAGGGT CGGAACAGGA 
7621 GAGCGCACGA GGGAGCTTCC AGGGGGAAAC GCCTGGTATC TTTATAGTCC TGTCGGGTTT 
7681 CGCCACCTCT GACTTGAGCG TCGATTTTTG TGATGCTCGT CAGGGGGGCG GAGCCTATGG 
7741 AAAAACGCCA GCAACGCGGC CTTTTTACGG TTCCTGGCCT TTTGCTGGCC TTTTGCTCAC 
7801 ATGTTCTTTC CTGCGTTATC CCCTGATTCT GTGGATAACC GTATTACCGC CTTTGAGTGA 
7861 GCTGATACCG CTCGCCGCAG CCGAACGACC GAGCGCAGCG AGTCAGTGAG CGAGGAAGCG 
7921 GAAGAGCGCC TGATGCGGTA TTTTCTCCTT ACGCATCTGT GCGGTATTTC ACACCGCATA 
7981 TGGTGCACTC TCAGTACAAT CTGCTCTGAT GCCGCATAGT TAAGCCAGTA TACACTCCGC 
8041 TATCGCTACG TGACTGGGTC ATGGCTGCGC CCCGACACCC GCCAACACCC GCTGACGCGC 
8101 CCTGACGGGC TTGTCTGCTC CCGGCATCCG CTTACAGACA AGCTGTGACC GTCTCCGGGA 
8161 GCTGCATGTG TCAGAGGTTT TCACCGTCAT CACCGAAACG CGCGAGGCAG