pACT2 AD

pACT2 generates a fusion of the GAL4 AD (amino acids 768–881), an HA epitope tag, and a protein of interest (or protein encoded by a cDNA in a fusion library) cloned into the MCS in the correct orientation and reading frame. pACT2, which is derived from pACT (1), contains a unique EcoR I site in the MCS. The hybrid protein is expressed at high levels in yeast host cells from the constitutive ADH1 promoter (P); transcription is terminated at the ADH1 transcription termination signal (T). The protein is targeted to the yeast nucleus by the nuclear localization sequence from SV40 T-antigen which has been cloned into the 5’ end of the GAL4 AD sequence (2). pACT2 is a shuttle vector that replicates autonomously in both E. coli and S. cerevisiae and carries the bla gene, which confers ampicillin resistance in E. coli. pACT2 also contains the LEU2 nutritional gene that allows yeast auxotrophs to grow on limiting synthetic media. Transformants with AD/library plasmids can be selected by complementation by the LEU2 gene by using an E. coli strain that carries a leuB mutation (e.g., HB101).

0001 GCTTTGAAGA AAAATGCGCC TTATTCAATC TTTGCTATAA AAAATGGCCC AAAATCTCAC 
0061 ATTGGAAGAC ATTTGATGAC CTCATTTCTT TCAATGAAGG GCCTAACGGA GTTGACTAAT 
0121 GTTGTGGGAA ATTGGAGCGA TAAGCGTGCT TCTGCCGTGG CCAGGACAAC GTATACTCAT 
0181 CAGATAACAG CAATACCTGA TCACTACTTC GCACTAGTTT CTCGGTACTA TGCATATGAT 
0241 CCAATATCAA AGGAAATGAT AGCATTGAAG GATGAGACTA ATCCAATTGA GGAGTGGCAG 
0301 CATATAGAAC AGCTAAAGGG TAGTGCTGAA GGAAGCATAC GATACCCCGC ATGGAATGGG 
0361 ATAATATCAC AGGAGGTACT AGACTACCTT TCATCCTACA TAAATAGACG CATATAAGTA 
0421 CGCATTTAAG CATAAACACG CACTATGCCG TTCTTCTCAT GTATATATAT ATACAGGCAA 
0481 CACGCAGATA TAGGTGCGAC GTGAACAGTG AGCTGTATGT GCGCAGCTCG CGTTGCATTT 
0541 TCGGAAGCGC TCGTTTTCGG AAACGCTTTG AAGTTCCTAT TCCGAAGTTC CTATTCTCTA 
0601 GAAAGTATAG GAACTTCAGA GCGCTTTTGA AAACCAAAAG CGCTCTGAAG ACGCACTTTC 
0661 AAAAAACCAA AAACGCACCG GACTGTAACG AGCTACTAAA ATATTGCGAA TACCGCTTCC 
0721 ACAAACATTG CTCAAAAGTA TCTCTTTGCT ATATATCTCT GTGCTATATC CCTATATAAC 
0781 CTACCCATCC ACCTTTCGCT CCTTGAACTT GCATCTAAAC TCGACCTCTA CATTTTTTAT 
0841 GTTTATCTCT AGTATTACTC TTTAGACAAA AAAATTGTAG TAAGAACTAT TCATAGAGTG 
0901 AATCGAAAAC AATACGAAAA TGTAAACATT TCCTATACGT AGTATATAGA GACAAAATAG 
0961 AAGAAACCGT TCATAATTTT CTGACCAATG AAGAATCATC AACGCTATCA CTTTCTGTTC 
1021 ACAAAGTATG CGCAATCCAC ATCGGTATAG AATATAATCG GGGATGCCTT TATCTTGAAA 
1081 AAATGCACCC GCAGCTTCGC TAGTAATCAG TAAACGCGGG AAGTGGAGTC AGGCTTTTTT 
1141 TATGGAAGAG AAAATAGACA CCAAAGTAGC CTTCTTCTAA CCTTAACGGA CCTACAGTGC 
1201 AAAAAGTTAT CAAGAGACTG CATTATAGAG CGCACAAAGG AGAAAAAAAG TAATCTAAGA 
1261 TGCTTTGTTA GAAAAATAGC GCTCTCGGGA TGCATTTTTG TAGAACAAAA AAGAAGTATA 
1321 GATTCTTTGT TGGTAAAATA GCGCTCTCGC GTTGCATTTC TGTTCTGTAA AAATGCAGCT 
1381 CAGATTCTTT GTTTGAAAAA TTAGCGCTCT CGCGTTGCAT TTTTGTTTTA CAAAAATGAA 
1441 GCACAGATTC TTCGTTGGTA AAATAGCGCT TTCGCGTTGC ATTTCTGTTC TGTAAAAATG 
1501 CAGCTCAGAT TCTTTGTTTG AAAAATTAGC GCTCTCGCGT TGCATTTTTG TTCTACAAAA 
1561 TGAAGCACAG ATGCTTCGTT AACAAAGATA TGCTATTGAA GTGCAAGATG GAAACGCAGA 
1621 AAATGAACCG GGGATGCGAC GTGCAAGATT ACCTATGCAA TAGATGCAAT AGTTTCTCCA 
1681 GGAACCGAAA TACATACATT GTCTTCCGTA AAGCGCTAGA CTATATATTA TTATACAGGT 
1741 TCAAATATAC TATCTGTTTC AGGGAAAACT CCCAGGTTCG GATGTTCAAA ATTCAATGAT 
1801 GGGTAACAAG TACGATCGTA AATCTGTAAA ACAGTTTGTC GGATATTAGG CTGTATCTCC 
1861 TCAAAGCGTA TTCGAATATC ATTGAGAAGC TGCAGCGTCA CATCGGATAA TAATGATGGC 
1921 AGCCATTGTA GAAGTGCCTT TTGCATTTCT AGTCTCTTTC TCGGTCTAGC TAGTTTTACT 
1981 ACATCGCGAA GATAGAATCT TAGATCACAC TGCCTTTGCT GAGCTGGATC AATAGAGTAA 
2041 CAAAAGAGTG GTAAGGAACT GTGGGAATAC TCAGGTATCG TAAGATGCAA GAGTTCGAAT 
2101 CTCTTAGCAA CCATTATTTT TTTCCTCAAC ATAACGAGAA CACACAGGGG CGCTATCGCA 
2161 CAGAATCAAA TTCGATGACT GGAAATTTTT TGTTAATTTC AGAGGTCGCC TGACGCATAT 
2221 ACCTTTTTCA ACTGAAAAAT TGGGAGAAAA AGGAAAGGTG AGAGGCCGGA ACCGGCTTTT 
2281 CATATAGAAT AGAGAAGCGT TCATGACTAA ATGCTTGCAT CACAATACTT GAAGTTGACA 
2341 ATATTATTTA AGGACCTATT GTTTTTTCCA ATAGGTGGTT AGCAATCGTC TTACTTTCTA 
2401 ACTTTTCTTA CCTTTTACAT TTCAGCAATA TATATATATA TTTCAAGGAT ATACCATTCT 
2461 AATGTCTGCC CCTATGTCTG CCCCTAAGAA GATCGTCGTT TTGCCAGGTG ACCACGTTGG 
2521 TCAAGAAATC ACAGCCGAAG CCATTAAGGT TCTTAAAGCT ATTTCTGATG TTCGTTCCAA 
2581 TGTCAAGTTC GATTTCGAAA ATCATTTAAT TGGTGGTGCT GCTATCGATG CTACAGGTGT 
2641 CCCACTTCCA GATGAGGCGC TGGAAGCCTC CAAGAAGGTT GATGCCGTTT TGTTAGGTGC 
2701 TGTGGGTGGT CCTAAATGGG GTACCGGTAG TGTTAGACCT GAACAAGGTT TACTAAAAAT 
2761 CCGTAAAGAA CTTCAATTGT ACGCCAACTT AAGACCATGT AACTTTGCAT CCGACTCTCT 
2821 TTTAGACTTA TCTCCAATCA AGCCACAATT TGCTAAAGGT ACTGACTTCG TTGTTGTCAG 
2881 AGAATTAGTG GGAGGTATTT ACTTTGGTAA GAGAAAGGAA GACGATGGTG ATGGTGTCGC 
2941 TTGGGATAGT GAACAATACA CCGTTCCAGA AGTGCAAAGA ATCACAAGAA TGGCCGCTTT 
3001 CATGGCCCTA CAACATGAGC CACCATTGCC TATTTGGTCC TTGGATAAAG CTAATGTTTT 
3061 GGCCTCTTCA AGATTATGGA GAAAAACTGT GGAGGAAACC ATCAAGAACG AATTTCCTAC 
3121 ATTGAAGGTT CAACATCAAT TGATTGATTC TGCCGCCATG ATCCTAGTTA AGAACCCAAC 
3181 CCACCTAAAT GGTATTATAA TCACCAGCAA CATGTTTGGT GATATCATCT CCGATGAAGC 
3241 CTCCGTTATC CCAGGTTCCT TGGGTTTGTT GCCATCTGCG TCCTTGGCCT CTTTGCCAGA 
3301 CAAGAACACC GCATTTGGTT TGTACGAACC ATGCCACGGT TCTGCTCCAG ATTTGCCAAA 
3361 GAATAAGGTT GACCCTATCG CCACTATCTT GTCTGCTGCA ATGATGTTGA AATTGTCATT 
3421 GAACTTGCCT GAAGAAGGTA AGGCCATTGA AGATGCAGTT AAAAAGGTTT TGGATGCAGG 
3481 TATCAGAACT GGTGATTTAG GTGGTTCCAA CAGTACCACC GAAGTCGGTG ATGCTGTCGC 
3541 CGAAGAAGTT AAGAAAATCC TTGCTTAAAA AGATTCTCTT TTTTTATGAT ATTTGTACAT 
3601 AAACTTTATA AATGAAATTC ATAATAGAAA CGACACGAAA TTACAAAATG GAATATGTTC 
3661 ATAGGGTAGA CGAAACTATA TACGCAATCT ACATACATTT ATCAAGAAGG AGAAAAAGGA 
3721 GGATAGTAAA GGAATACAGG TAAGCAAATT GATACTAATG GCTCAACGTG ATAAGGAAAA 
3781 AGAATTGCAC TTTAACATTA ATATTGACAA GGAGGAGGGC ACCACACAAA AAGTTAGGTG 
3841 TAACAGAAAA TCATGAAACT ACGATTCCTA ATTTGATATT GGAGGATTTT CTCTAAAAAA 
3901 AAAAAAATAC AACAAATAAA AAACACTCAA TGACCTGACC ATTTGATGGA GTTTAAGTCA 
3961 ATACCTTCTT GAACCATTTC CCATAATGGT GAAAGTTCCC TCAAGAATTT TACTCTGTCA 
4021 GAAACGGCCT TAACGACGTA GTCGACCAAT TCCGATCATA TCAATAACCC TTAATATAAC 
4081 TTCGTATAAT GTATGCTATC GAAGTTATTA GGTCTGAAGA GGAGTTTACG TCCAGCCAAG 
4141 CTAGCCTGGC TGCAGGTCGA GCGGCCGCGA TCCGGAACCC TTAATATAAC TTCGTATAAT 
4201 GTATGCTATA CGAAGTTATT AGGTCCCTCG ACCAATTCCG ATCATATTCA ATAACCCTTA 
4261 ATATAACTTC GTATAATGTA TGCTATACGA AGTTATTAGG TCTGAAGAGG AGTTTACGTC 
4321 CGCTAGCTTG GCTGCAGGTC GAGCGGCCGC GATCCGGAAC CCTTAATATA ACTTCGTATA 
4381 ATGTATGCTA TACGAAGTTA TTAGGTCCCT CGCACATGCC GGTAGAGGTG TGGTCAATAA 
4441 GAGCGACCTC ATGCTATACC TGAGAAAGCA ACCTGACCTA CAGGAAAGAG TTACTCAAGA 
4501 ACAAGAATTT TCGTTTTAAA ACCTAAGAGT CACTTTAAAA TTTGTATACA CTTATTTTTT 
4561 TTATAACTTA TTTAATAATA AAAATCATAA ATCATAAGAA ATTCGCTTAT TTAGAAGTGT 
4621 CAACAACGTA TCTACCAACG ATTTGACCCT TTTCCATCTT TTCGTAAATT TCTGGCAAGG 
4681 TAGACAAGCC GACAACCTTG ATTGGAGACT TGACCAAACC TCTGGCGAAG AAGTCCAAAG 
4741 CTTCTGAATA AGCCCTCGTA ATATATTTTC ATGAAGAATT TAGGTCCAAA AAAAAGATGG 
4801 GCATTAATTC TAGTCATTTA AAAAATTCTA TAGATCAGAG GTTACATGGC CAAGATTGAA 
4861 ACTTAGAGGA GTATAGTTAC ATAAAAGAAG GCAAAACGAT GTATAAATGA AAGAAATTGA 
4921 GATGGTGCAC GATGCACAGT TGAAGTGAAC TTGCGGGGTT TTTCAGTATC TACGATTCAT 
4981 AGATCTCTCG AGCTCGAATT CGGATCCCCG GGGCCTCCAT GGCCATATGA CCACCCAAGC 
5041 TAGCGTAATC TGGAACATCG TATGGGTAAG CCATACAGAT CTCTTTTTTT GGGTTTGGTG 
5101 GGGTATCTTC ATCATCGAAT AGATAGTTAT ATACATCATC CATTGTAGTG GTATTAAACA 
5161 TCCCTGTAGT GATTCCAAAC GCGTTATACG CAGTTTGGTC CGTCCAACCA GGTGACAGTG 
5221 GTTTTGAATT ATTACCATCA TCAATTTTAC TAGCCGTGAT TTCATTATTC ATGAAGTTAT 
5281 CATGAACGTT AGAGGAGGCA ATTGGTTGTG AAAGCGCTTG AGAATTTGTT TGAGTTGTTA 
5341 TGAGGTTCGG ACCGTTGCTA CTGTTAGTGA AAGTGAAGGA CAATGAGCTA TCAGCAATAT 
5401 TCCCACTTTG ATTAAAATTG GCGGCGGTAC CCAATTCGAC CTTTCTCTTC TTTTTTGGAG 
5461 GCTCGGGAAT TAATTCCGCT TTATCCATCT TTGCAAAGCT TGGAGTTGAT TGTATGCTTG 
5521 GTATAGCTTG AAATATTGTG CAGAAAAAGA AACAAGGAAG AAAGGGAACG AGAACAATGA 
5581 CGAGGAAACA AAAGATTAAT AATTGCAGGT CTATTTATAC TTGATAGCAA AGCGGCAAAC 
5641 TTTTTTTATT TCAAATTCAA GTAACTGGAA GGAAGGCCGT ATACCGTTGC TCATTAGAGA 
5701 GTAGTGTGCG TGAATGAAGG AAGGAAAAAG TTTCGTGTGT TCGAAGATAC CCCTCATCAG 
5761 CTCTGGAACA ACGACATCTG TTGGTGCTGT CTTTGTCGTT AATTTTTTCC TTTAGTGTCT 
5821 TCCATCATTT TTTTTGTCAT TGCGGATATG GTGAGACAAC AACGGGGGAG AGAGAAAAGA 
5881 AAAAAAAAGA AAAGAAGTTG CTGCCTCGCG CGTTTCGGTG ATGACGGTGA AAACCTCTGA 
5941 CACATGCAGC TCCCGGAGAC GGTCACAGCT TGTCTGTAAG CGGATGCCGG GAGCAGACAA 
6001 GCCCGTCAGG GCGCGTCAGC GGGTGTTGGC GGGTGTCGGG GCGCAGCCAT GACCCAGTCA 
6061 CGTAGCGATA GCGGAGTGTA TACTGGCTTA ACTATGCGGC ATCAGAGCAG ATTGTACTGA 
6121 GAGTGCACCA TATGCGGTGT GAAATACCGC ACAGATGCGT AAGGAGAAAA TACCGCATCA 
6181 GGCGCTCTTC CGCTTCCTCG CTCACTGACT CGCTGCGCTC GGTCGTTCGG CTGCGGCGAG 
6241 CGGTATCAGC TCACTCAAAG GCGGTAATAC GGTTATCCAC AGAATCAGGG GATAACGCAG 
6301 GAAAGAACAT GTGAGCAAAA GGCCAGCAAA AGGCCAGGAA CCGTAAAAAG GCCGCGTTGC 
6361 TGGCGTTTTT CCATAGGCTC CGCCCCCCTG ACGAGCATCA CAAAAATCGA CGCTCAAGTC 
6421 AGAGGTGGCG AAACCCGACA GGACTATAAA GATACCAGGC GTTTCCCCCT GGAAGCTCCC 
6481 TCGTGCGCTC TCCTGTTCCG ACCCTGCCGC TTACCGGATA CCTGTCCGCC TTTCTCCCTT 
6541 CGGGAAGCGT GGCGCTTTCT CATAGCTCAC GCTGTAGGTA TCTCAGTTCG GTGTAGGTCG 
6601 TTCGCTCCAA GCTGGGCTGT GTGCACGAAC CCCCCGTTCA GCCCGACCGC TGCGCCTTAT 
6661 CCGGTAACTA TCGTCTTGAG TCCAACCCGG TAAGACACGA CTTATCGCCA CTGGCAGCAG 
6721 CCACTGGTAA CAGGATTAGC AGAGCGAGGT ATGTAGGCGG TGCTACAGAG TTCTTGAAGT 
6781 GGTGGCCTAA CTACGGCTAC ACTAGAAGGA CAGTATTTGG TATCTGCGCT CTGCTGAAGC 
6841 CAGTTACCTT CGGAAAAAGA GTTGGTAGCT CTTGATCCGG CAAACAAACC ACCGCTGGTA 
6901 GCGGTGGTTT TTTTGTTTGC AAGCAGCAGA TTACGCGCAG AAAAAAAGGA TCTCAAGAAG 
6961 ATCCTTTGAT CTTTTCTACG GGGTCTGACG CTCAGTGGAA CGAAAACTCA CGTTAAGGGA 
7021 TTTTGGTCAT GAGATTATCA AAAAGGATCT TCACCTAGAT CCTTTTAAAT TAAAAATGAA 
7081 GTTTTAAATC AATCTAAAGT ATATATGAGT AAACTTGGTC TGACAGTTAC CAATGCTTAA 
7141 TCAGTGAGGC ACCTATCTCA GCGATCTGTC TATTTCGTTC ATCCATAGTT GCCTGACTCC 
7201 CCGTCGTGTA GATAACTACG ATACGGGAGG GCTTACCATC TGGCCCCAGT GCTGCAATGA 
7261 TACCGCGAGA CCCACGCTCA CCGGCTCCAG ATTTATCAGC AATAAACCAG CCAGCCGGAA 
7321 GGGCCGAGCG CAGAAGTGGT CCTGCAACTT TATCCGCCTC CATCCAGTCT ATTAATTGTT 
7381 GCCGGGAAGC TAGAGTAAGT AGTTCGCCAG TTAATAGTTT GCGCAACGTT GTTGCCATTG 
7441 CTGCAGGCAT CGTGGTGTCA CGCTCGTCGT TTGGTATGGC TTCATTCAGC TCCGGTTCCC 
7501 AACGATCAAG GCGAGTTACA TGATCCCCCA TGTTGTGCAA AAAAGCGGTT AGCTCCTTCG 
7561 GTCCTCCGAT CGTTGTCAGA AGTAAGTTGG CCGCAGTGTT ATCACTCATG GTTATGGCAG 
7621 CACTGCATAA TTCTCTTACT GTCATGCCAT CCGTAAGATG CTTTTCTGTG ACTGGTGAGT 
7681 ACTCAACCAA GTCATTCTGA GAATAGTGTA TGCGGCGACC GAGTTGCTCT TGCCCGGCGT 
7741 CAACACGGGA TAATACCGCG CCACATAGCA GAACTTTAAA AGTGCTCATC ATTGGAAAAC 
7801 GTTCTTCGGG GCGAAAACTC TCAAGGATCT TACCGCTGTT GAGATCCAGT TCGATGTAAC 
7861 CCACTCGTGC ACCCAACTGA TCTTCAGCAT CTTTTACTTT CACCAGCGTT TCTGGGTGAG 
7921 CAAAAACAGG AAGGCAAAAT GCCGCAAAAA AGGGAATAAG GGCGACACGG AAATGTTGAA 
7981 TACTCATACT CTTCCTTTTT CAATATTATT GAAGCATTTA TCAGGGTTAT TGTCTCATGA 
8041 GCGGATACAT ATTTGAATGT ATTTAGAAAA ATAAACAAAT AGGGGTTCCG CGCACATTTC 
8101 CCCGAAAAGT GCCACCT