pPIC9K

pPIC9K载体中存在卡那抗性基因，允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝，载体其余部分与pPIC9载体完全一样。pPIC9K载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。 pPIC9K载体详细信息如下：

• pPIC9载体大小9276 bp，是融合表达载体。
• 载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.
• 利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。
• 在载体构建过程中，你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。
• 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
• 为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
• 为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
• 将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。

0001 AGATCTAACA TCCAAAGACG AAAGGTTGAA TGAAACCTTT TTGCCATCCG ACATCCACAG 
0061 GTCCATTCTC ACACATAAGT GCCAAACGCA ACAGGAGGGG ATACACTAGC AGCAGACCGT 
0121 TGCAAACGCA GGACCTCCAC TCCTCTTCTC CTCAACACCC ACTTTTGCCA TCGAAAAACC 
0181 AGCCCAGTTA TTGGGCTTGA TTGGAGCTCG CTCATTCCAA TTCCTTCTAT TAGGCTACTA 
0241 ACACCATGAC TTTATTAGCC TGTCTATCCT GGCCCCCCTG GCGAGGTTCA TGTTTGTTTA 
0301 TTTCCGAATG CAACAAGCTC CGCATTACAC CCGAACATCA CTCCAGATGA GGGCTTTCTG 
0361 AGTGTGGGGT CAAATAGTTT CATGTTCCCC AAATGGCCCA AAACTGACAG TTTAAACGCT 
0421 GTCTTGGAAC CTAATATGAC AAAAGCGTGA TCTCATCCAA GATGAACTAA GTTTGGTTCG 
0481 TTGAAATGCT AACGGCCAGT TGGTCAAAAA GAAACTTCCA AAAGTCGCCA TACCGTTTGT 
0541 CTTGTTTGGT ATTGATTGAC GAATGCTCAA AAATAATCTC ATTAATGCTT AGCGCAGTCT 
0601 CTCTATCGCT TCTGAACCCC GGTGCACCTG TGCCGAAACG CAAATGGGGA AACACCCGCT 
0661 TTTTGGATGA TTATGCATTG TCTCCACATT GTATGCTTCC AAGATTCTGG TGGGAATACT 
0721 GCTGATAGCC TAACGTTCAT GATCAAAATT TAACTGTTCT AACCCCTACT TGACAGCAAT 
0781 ATATAAACAG AAGGAAGCTG CCCTGTCTTA AACCTTTTTT TTTATCATCA TTATTAGCTT 
0841 ACTTTCATAA TTGCGACTGG TTCCAATTGA CAAGCTTTTG ATTTTAACGA CTTTTAACGA 
0901 CAACTTGAGA AGATCAAAAA ACAACTAATT ATTCGAAGGA TCCAAACGAT GAGATTTCCT 
0961 TCAATTTTTA CTGCAGTTTT ATTCGCAGCA TCCTCCGCAT TAGCTGCTCC AGTCAACACT 
1021 ACAACAGAAG ATGAAACGGC ACAAATTCCG GCTGAAGCTG TCATCGGTTA CTCAGATTTA 
1081 GAAGGGGATT TCGATGTTGC TGTTTTGCCA TTTTCCAACA GCACAAATAA CGGGTTATTG 
1141 TTTATAAATA CTACTATTGC CAGCATTGCT GCTAAAGAAG AAGGGGTATC TCTCGAGAAA 
1201 AGAGAGGCTG AAGCTTACGT AGAATTCCCT AGGGCGGCCG CGAATTAATT CGCCTTAGAC 
1261 ATGACTGTTC CTCAGTTCAA GTTGGGCACT TACGAGAAGA CCGGTCTTGC TAGATTCTAA 
1321 TCAAGAGGAT GTCAGAATGC CATTTGCCTG AGAGATGCAG GCTTCATTTT TGATACTTTT 
1381 TTATTTGTAA CCTATATAGT ATAGGATTTT TTTTGTCATT TTGTTTCTTC TCGTACGAGC 
1441 TTGCTCCTGA TCAGCCTATC TCGCAGCTGA TGAATATCTT GTGGTAGGGG TTTGGGAAAA 
1501 TCATTCGAGT TTGATGTTTT TCTTGGTATT TCCCACTCCT CTTCAGAGTA CAGAAGATTA 
1561 AGTGAGAAGT TCGTTTGTGC AAGCTTATCG ATAAGCTTTA ATGCGGTAGT TTATCACAGT 
1621 TAAATTGCTA ACGCAGTCAG GCACCGTGTA TGAAATCTAA CAATGCGCTC ATCGTCATCC 
1681 TCGGCACCGT CACCCTGGAT GCTGTAGGCA TAGGCTTGGT TATGCCGGTA CTGCCGGGCC 
1741 TCTTGCGGGA TATCGTCCAT TCCGACAGCA TCGCCAGTCA CTATGGCGTG CTGCTAGCGC 
1801 TATATGCGTT GATGCAATTT CTATGCGCAC CCGTTCTCGG AGCACTGTCC GACCGCTTTG 
1861 GCCGCCGCCC AGTCCTGCTC GCTTCGCTAC TTGGAGCCAC TATCGACTAC GCGATCATGG 
1921 CGACCACACC CGTCCTGTGG ATCTATCGAA TCTAAATGTA AGTTAAAATC TCTAAATAAT 
1981 TAAATAAGTC CCAGTTTCTC CATACGAACC TTAACAGCAT TGCGGTGAGC ATCTAGACCT 
2041 TCAACAGCAG CCAGATCCAT CACTGCTTGG CCAATATGTT TCAGTCCCTC AGGAGTTACG 
2101 TCTTGTGAAG TGATGAACTT CTGGAAGGTT GCAGTGTTAA CTCCGCTGTA TTGACGGGCA 
2161 TATCCGTACG TTGGCAAAGT GTGGTTGGTA CCGGAGGAGT AATCTCCACA ACTCTCTGGA 
2221 GAGTAGGCAC CAACAAACAC AGATCCAGCG TGTTGTACTT GATCAACATA AGAAGAAGCA 
2281 TTCTCGATTT GCAGGATCAA GTGTTCAGGA GCGTACTGAT TGGACATTTC CAAAGCCTGC 
2341 TCGTAGGTTG CAACCGATAG GGTTGTAGAG TGTGCAATAC ACTTGCGTAC AATTTCAACC 
2401 CTTGGCAACT GCACAGCTTG GTTGTGAACA GCATCTTCAA TTCTGGCAAG CTCCTTGTCT 
2461 GTCATATCGA CAGCCAACAG AATCACCTGG GAATCAATAC CATGTTCAGC TTGAGACAGA 
2521 AGGTCTGAGG CAACGAAATC TGGATCAGCG TATTTATCAG CAATAACTAG AACTTCAGAA 
2581 GGCCCAGCAG GCATGTCAAT ACTACACAGG GCTGATGTGT CATTTTGAAC CATCATCTTG 
2641 GCAGCAGTAA CGAACTGGTT TCCTGGACCA AATATTTTGT CACACTTAGG AACAGTTTCT 
2701 GTTCCGTAAG CCATAGCAGC TACTGCCTGG GCGCCTCCTG CTAGCACGAT ACACTTAGCA 
2761 CCAACCTTGT GGGCAACGTA GATGACTTCT GGGGTAAGGG TACCATCCTT CTTAGGTGGA 
2821 GATGCAAAAA CAATTTCTTT GCAACCAGCA ACTTTGGCAG GAACACCCAG CATCAGGGAA 
2881 GTGGAAGGCA GAATTGCGGT TCCACCAGGA ATATAGAGGC CAACTTTCTC AATAGGTCTT 
2941 GCAAAACGAG AGCAGACTAC ACCAGGGCAA GTCTCAACTT GCAACGTCTC CGTTAGTTGA 
3001 GCTTCATGGA ATTTCCTGAC GTTATCTATA GAGAGATCAA TGGCTCTCTT AACGTTATCT 
3061 GGCAATTGCA TAAGTTCCTC TGGGAAAGGA GCTTCTAACA CAGGTGTCTT CAAAGCGACT 
3121 CCATCAAACT TGGCAGTTAG TTCTAAAAGG GCTTTGTCAC CATTTTGACG AACATTGTCG 
3181 ACAATTGGTT TGACTAATTC CATAATCTGT TCCGTTTTCT GGATAGGACG ACGAAGGGCA 
3241 TCTTCAATTT CTTGTGAGGA GGCCTTAGAA ACGTCAATTT TGCACAATTC AATACGACCT 
3301 TCAGAAGGGA CTTCTTTAGG TTTGGATTCT TCTTTAGGTT GTTCCTTGGT GTATCCTGGC 
3361 TTGGCATCTC CTTTCCTTCT AGTGACCTTT AGGGACTTCA TATCCAGGTT TCTCTCCACC 
3421 TCGTCCAACG TCACACCGTA CTTGGCACAT CTAACTAATG CAAAATAAAA TAAGTCAGCA 
3481 CATTCCCAGG CTATATCTTC CTTGGATTTA GCTTCTGCAA GTTCATCAGC TTCCTCCCTA 
3541 ATTTTAGCGT TCAACAAAAC TTCGTCGTCA AATAACCGTT TGGTATAAGA ACCTTCTGGA 
3601 GCATTGCTCT TACGATCCCA CAAGGTGGCT TCCATGGCTC TAAGACCCTT TGATTGGCCA 
3661 AAACAGGAAG TGCGTTCCAA GTGACAGAAA CCAACACCTG TTTGTTCAAC CACAAATTTC 
3721 AAGCAGTCTC CATCACAATC CAATTCGATA CCCAGCAACT TTTGAGTTGC TCCAGATGTA 
3781 GCACCTTTAT ACCACAAACC GTGACGACGA GATTGGTAGA CTCCAGTTTG TGTCCTTATA 
3841 GCCTCCGGAA TAGACTTTTT GGACGAGTAC ACCAGGCCCA ACGAGTAATT AGAAGAGTCA 
3901 GCCACCAAAG TAGTGAATAG ACCATCGGGG CGGTCAGTAG TCAAAGACGC CAACAAAATT 
3961 TCACTGACAG GGAACTTTTT GACATCTTCA GAAAGTTCGT ATTCAGTAGT CAATTGCCGA 
4021 GCATCAATAA TGGGGATTAT ACCAGAAGCA ACAGTGGAAG TCACATCTAC CAACTTTGCG 
4081 GTCTCAGAAA AAGCATAAAC AGTTCTACTA CCGCCATTAG TGAAACTTTT CAAATCGCCC 
4141 AGTGGAGAAG AAAAAGGCAC AGCGATACTA GCATTAGCGG GCAAGGATGC AACTTTATCA 
4201 ACCAGGGTCC TATAGATAAC CCTAGCGCCT GGGATCATCC TTTGGACAAC TCTTTCTGCC 
4261 AAATCTAGGT CCAAAATCAC TTCATTGATA CCATTATTGT ACAACTTGAG CAAGTTGTCG 
4321 ATCAGCTCCT CAAATTGGTC CTCTGTAACG GATGACTCAA CTTGCACATT AACTTGAAGC 
4381 TCAGTCGATT GAGTGAACTT GATCAGGTTG TGCAGCTGGT CAGCAGCATA GGGAAACACG 
4441 GCTTTTCCTA CCAAACTCAA GGAATTATCA AACTCTGCAA CACTTGCGTA TGCAGGTAGC 
4501 AAGGGAAATG TCATACTTGA AGTCGGACAG TGAGTGTAGT CTTGAGAAAT TCTGAAGCCG 
4561 TATTTTTATT ATCAGTGAGT CAGTCATCAG GAGATCCTCT ACGCCGGACG CATCGTGGCC 
4621 GACCTGCAGG GGGGGGGGGG GCGCTGAGGT CTGCCTCGTG AAGAAGGTGT TGCTGACTCA 
4681 TACCAGGCCT GAATCGCCCC ATCATCCAGC CAGAAAGTGA GGGAGCCACG GTTGATGAGA 
4741 GCTTTGTTGT AGGTGGACCA GTTGGTGATT TTGAACTTTT GCTTTGCCAC GGAACGGTCT 
4801 GCGTTGTCGG GAAGATGCGT GATCTGATCC TTCAACTCAG CAAAAGTTCG ATTTATTCAA 
4861 CAAAGCCGCC GTCCCGTCAA GTCAGCGTAA TGCTCTGCCA GTGTTACAAC CAATTAACCA 
4921 ATTCTGATTA GAAAAACTCA TCGAGCATCA AATGAAACTG CAATTTATTC ATATCAGGAT 
4981 TATCAATACC ATATTTTTGA AAAAGCCGTT TCTGTAATGA AGGAGAAAAC TCACCGAGGC 
5041 AGTTCCATAG GATGGCAAGA TCCTGGTATC GGTCTGCGAT TCCGACTCGT CCAACATCAA 
5101 TACAACCTAT TAATTTCCCC TCGTCAAAAA TAAGGTTATC AAGTGAGAAA TCACCATGAG 
5161 TGACGACTGA ATCCGGTGAG AATGGCAAAA GCTTATGCAT TTCTTTCCAG ACTTGTTCAA 
5221 CAGGCCAGCC ATTACGCTCG TCATCAAAAT CACTCGCATC AACCAAACCG TTATTCATTC 
5281 GTGATTGCGC CTGAGCGAGA CGAAATACGC GATCGCTGTT AAAAGGACAA TTACAAACAG 
5341 GAATCGAATG CAACCGGCGC AGGAACACTG CCAGCGCATC AACAATATTT TCACCTGAAT 
5401 CAGGATATTC TTCTAATACC TGGAATGCTG TTTTCCCGGG GATCGCAGTG GTGAGTAACC 
5461 ATGCATCATC AGGAGTACGG ATAAAATGCT TGATGGTCGG AAGAGGCATA AATTCCGTCA 
5521 GCCAGTTTAG TCTGACCATC TCATCTGTAA CATCATTGGC AACGCTACCT TTGCCATGTT 
5581 TCAGAAACAA CTCTGGCGCA TCGGGCTTCC CATACAATCG ATAGATTGTC GCACCTGATT 
5641 GCCCGACATT ATCGCGAGCC CATTTATACC CATATAAATC AGCATCCATG TTGGAATTTA 
5701 ATCGCGGCCT CGAGCAAGAC GTTTCCCGTT GAATATGGCT CATAACACCC CTTGTATTAC 
5761 TGTTTATGTA AGCAGACAGT TTTATTGTTC ATGATGATAT ATTTTTATCT TGTGCAATGT 
5821 AACATCAGAG ATTTTGAGAC ACAACGTGGC TTTCCCCCCC CCCCCTGCAG GTCGGCATCA 
5881 CCGGCGCCAC AGGTGCGGTT GCTGGCGCCT ATATCGCCGA CATCACCGAT GGGGAAGATC 
5941 GGGCTCGCCA CTTCGGGCTC ATGAGCGCTT GTTTCGGCGT GGGTATGGTG GCAGGCCCCG 
6001 TGGCCGGGGG ACTGTTGGGC GCCATCTCCT TGCATGCACC ATTCCTTGCG GCGGCGGTGC 
6061 TCAACGGCCT CAACCTACTA CTGGGCTGCT TCCTAATGCA GGAGTCGCAT AAGGGAGAGC 
6121 GTCGAGTATC TATGATTGGA AGTATGGGAA TGGTGATACC CGCATTCTTC AGTGTCTTGA 
6181 GGTCTCCTAT CAGATTATGC CCAACTAAAG CAACCGGAGG AGGAGATTTC ATGGTAAATT 
6241 TCTCTGACTT TTGGTCATCA GTAGACTCGA ACTGTGAGAC TATCTCGGTT ATGACAGCAG 
6301 AAATGTCCTT CTTGGAGACA GTAAATGAAG TCCCACCAAT AAAGAAATCC TTGTTATCAG 
6361 GAACAAACTT CTTGTTTCGA ACTTTTTCGG TGCCTTGAAC TATAAAATGT AGAGTGGATA 
6421 TGTCGGGTAG GAATGGAGCG GGCAAATGCT TACCTTCTGG ACCTTCAAGA GGTATGTAGG 
6481 GTTTGTAGAT ACTGATGCCA ACTTCAGTGA CAACGTTGCT ATTTCGTTCA AACCATTCCG 
6541 AATCCAGAGA AATCAAAGTT GTTTGTCTAC TATTGATCCA AGCCAGTGCG GTCTTGAAAC 
6601 TGACAATAGT GTGCTCGTGT TTTGAGGTCA TCTTTGTATG AATAAATCTA GTCTTTGATC 
6661 TAAATAATCT TGACGAGCCA AGGCGATAAA TACCCAAATC TAAAACTCTT TTAAAACGTT 
6721 AAAAGGACAA GTATGTCTGC CTGTATTAAA CCCCAAATCA GCTCGTAGTC TGATCCTCAT 
6781 CAACTTGAGG GGCACTATCT TGTTTTAGAG AAATTTGCGG AGATGCGATA TCGAGAAAAA 
6841 GGTACGCTGA TTTTAAACGT GAAATTTATC TCAAGATCTC TGCCTCGCGC GTTTCGGTGA 
6901 TGACGGTGAA AACCTCTGAC ACATGCAGCT CCCGGAGACG GTCACAGCTT GTCTGTAAGC 
6961 GGATGCCGGG AGCAGACAAG CCCGTCAGGG CGCGTCAGCG GGTGTTGGCG GGTGTCGGGG 
7021 CGCAGCCATG ACCCAGTCAC GTAGCGATAG CGGAGTGTAT ACTGGCTTAA CTATGCGGCA 
7081 TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA CAGATGCGTA 
7141 AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGCTCTTCC GCTTCCTCGC TCACTGACTC GCTGCGCTCG 
7201 GTCGTTCGGC TGCGGCGAGC GGTATCAGCT CACTCAAAGG CGGTAATACG GTTATCCACA 
7261 GAATCAGGGG ATAACGCAGG AAAGAACATG TGAGCAAAAG GCCAGCAAAA GGCCAGGAAC 
7321 CGTAAAAAGG CCGCGTTGCT GGCGTTTTTC CATAGGCTCC GCCCCCCTGA CGAGCATCAC 
7381 AAAAATCGAC GCTCAAGTCA GAGGTGGCGA AACCCGACAG GACTATAAAG ATACCAGGCG 
7441 TTTCCCCCTG GAAGCTCCCT CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA CCCTGCCGCT TACCGGATAC 
7501 CTGTCCGCCT TTCTCCCTTC GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC AATGCTCACG CTGTAGGTAT 
7561 CTCAGTTCGG TGTAGGTCGT TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG TGCACGAACC CCCCGTTCAG 
7621 CCCGACCGCT GCGCCTTATC CGGTAACTAT CGTCTTGAGT CCAACCCGGT AAGACACGAC 
7681 TTATCGCCAC TGGCAGCAGC CACTGGTAAC AGGATTAGCA GAGCGAGGTA TGTAGGCGGT 
7741 GCTACAGAGT TCTTGAAGTG GTGGCCTAAC TACGGCTACA CTAGAAGGAC AGTATTTGGT 
7801 ATCTGCGCTC TGCTGAAGCC AGTTACCTTC GGAAAAAGAG TTGGTAGCTC TTGATCCGGC 
7861 AAACAAACCA CCGCTGGTAG CGGTGGTTTT TTTGTTTGCA AGCAGCAGAT TACGCGCAGA 
7921 AAAAAAGGAT CTCAAGAAGA TCCTTTGATC TTTTCTACGG GGTCTGACGC TCAGTGGAAC 
7981 GAAAACTCAC GTTAAGGGAT TTTGGTCATG AGATTATCAA AAAGGATCTT CACCTAGATC 
8041 CTTTTAAATT AAAAATGAAG TTTTAAATCA ATCTAAAGTA TATATGAGTA AACTTGGTCT 
8101 GACAGTTACC AATGCTTAAT CAGTGAGGCA CCTATCTCAG CGATCTGTCT ATTTCGTTCA 
8161 TCCATAGTTG CCTGACTCCC CGTCGTGTAG ATAACTACGA TACGGGAGGG CTTACCATCT 
8221 GGCCCCAGTG CTGCAATGAT ACCGCGAGAC CCACGCTCAC CGGCTCCAGA TTTATCAGCA 
8281 ATAAACCAGC CAGCCGGAAG GGCCGAGCGC AGAAGTGGTC CTGCAACTTT ATCCGCCTCC 
8341 ATCCAGTCTA TTAATTGTTG CCGGGAAGCT AGAGTAAGTA GTTCGCCAGT TAATAGTTTG 
8401 CGCAACGTTG TTGCCATTGC TGCAGGCATC GTGGTGTCAC GCTCGTCGTT TGGTATGGCT 
8461 TCATTCAGCT CCGGTTCCCA ACGATCAAGG CGAGTTACAT GATCCCCCAT GTTGTGCAAA 
8521 AAAGCGGTTA GCTCCTTCGG TCCTCCGATC GTTGTCAGAA GTAAGTTGGC CGCAGTGTTA 
8581 TCACTCATGG TTATGGCAGC ACTGCATAAT TCTCTTACTG TCATGCCATC CGTAAGATGC 
8641 TTTTCTGTGA CTGGTGAGTA CTCAACCAAG TCATTCTGAG AATAGTGTAT GCGGCGACCG 
8701 AGTTGCTCTT GCCCGGCGTC AACACGGGAT AATACCGCGC CACATAGCAG AACTTTAAAA 
8761 GTGCTCATCA TTGGAAAACG TTCTTCGGGG CGAAAACTCT CAAGGATCTT ACCGCTGTTG 
8821 AGATCCAGTT CGATGTAACC CACTCGTGCA CCCAACTGAT CTTCAGCATC TTTTACTTTC 
8881 ACCAGCGTTT CTGGGTGAGC AAAAACAGGA AGGCAAAATG CCGCAAAAAA GGGAATAAGG 
8941 GCGACACGGA AATGTTGAAT ACTCATACTC TTCCTTTTTC AATATTATTG AAGCATTTAT 
9001 CAGGGTTATT GTCTCATGAG CGGATACATA TTTGAATGTA TTTAGAAAAA TAAACAAATA 
9061 GGGGTTCCGC GCACATTTCC CCGAAAAGTG CCACCTGACG TCTAAGAAAC CATTATTATC 
9121 ATGACATTAA CCTATAAAAA TAGGCGTATC ACGAGGCCCT TTCGTCTTCA AGAATTAATT 
9181 CTCATGTTTG ACAGCTTATC ATCGATAAGC TGACTCATGT TGGTATTGTG AAATAGACGC 
9241 AGATCGGGAA CACTGAAAAA TAACAGTTAT TATTCG