pBIND

The pBIND Vector is a high-copy plasmid in which the CMV immediate early promoter drives expression of a portion of the yeast GAL4 gene (amino acids 1–147) containing a DNA-binding domain. As with the pACT Vector, the DNAbinding domain sequence is flanked by a chimeric intron, a multiple cloning region, stop codons and an SV40 late polyadenylation region (Figures 4 and 5). The fusion gene region is flanked by T7 and T3 RNA polymerase promoters for the purpose of synthesizing sense and antisense RNA products, respectively. The Renilla luciferase gene on this vector is preceded by the SV40 early promoter and a growth hormone intron. Introns can increase protein expression through mRNA stability and nuclear to cytoplasmic transport effects (9–12). A synthetic polyadenylation sequence resides 3? of the Renilla luciferase gene. The plasmid backbone contains an f1 origin of replication for the production of ssDNA and the β-lactamase gene (Ampr) for selection in E. coli.

0001 TCAATATTGG CCATTAGCCA TATTATTCAT TGGTTATATA GCATAAATCA ATATTGGCTA 
0061 TTGGCCATTG CATACGTTGT ATCTATATCA TAATATGTAC ATTTATATTG GCTCATGTCC 
0121 AATATGACCG CCATGTTGGC ATTGATTATT GACTAGTTAT TAATAGTAAT CAATTACGGG 
0181 GTCATTAGTT CATAGCCCAT ATATGGAGTT CCGCGTTACA TAACTTACGG TAAATGGCCC 
0241 GCCTGGCTGA CCGCCCAACG ACCCCCGCCC ATTGACGTCA ATAATGACGT ATGTTCCCAT 
0301 AGTAACGCCA ATAGGGACTT TCCATTGACG TCAATGGGTG GAGTATTTAC GGTAAACTGC 
0361 CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT GCCAAGTCCG CCCCCTATTG ACGTCAATGA 
0421 CGGTAAATGG CCCGCCTGGC ATTATGCCCA GTACATGACC TTACGGGACT TTCCTACTTG 
0481 GCAGTACATC TACGTATTAG TCATCGCTAT TACCATGGTG ATGCGGTTTT GGCAGTACAC 
0541 CAATGGGCGT GGATAGCGGT TTGACTCACG GGGATTTCCA AGTCTCCACC CCATTGACGT 
0601 CAATGGGAGT TTGTTTTGGC ACCAAAATCA ACGGGACTTT CCAAAATGTC GTAACAACTG 
0661 CGATCGCCCG CCCCGTTGAC GCAAATGGGC GGTAGGCGTG TACGGTGGGA GGTCTATATA 
0721 AGCAGAGCTC GTTTAGTGAA CCGTCAGATC ACTAGAAGCT TTATTGCGGT AGTTTATCAC 
0781 AGTTAAATTG CTAACGCAGT CAGTGCTTCT GACACAACAG TCTCGAACTT AAGCTGCAGT 
0841 GACTCTCTTA AGGTAGCCTT GCAGAAGTTG GTCGTGAGGC ACTGGGCAGG TAAGTATCAA 
0901 GGTTACAAGA CAGGTTTAAG GAGACCAATA GAAACTGGGC TTGTCGAGAC AGAGAAGACT 
0961 CTTGCGTTTC TGATAGGCAC CTATTGGTCT TACTGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC 
1021 AGGTGTCCAC TCCCAGTTCA ATTACAGCTC TTAAGGCTAG AGTACTTAAT ACGACTCACT 
1081 ATAGGCTAGC CAGCTTGAAG CAAGCCTCCT GAAAGATGAA GCTACTGTCT TCTATCGAAC 
1141 AAGCATGCGA TATTTGCCGA CTTAAAAAGC TCAAGTGCTC CAAAGAAAAA CCGAAGTGCG 
1201 CCAAGTGTCT GAAGAACAAC TGGGAGTGTC GCTACTCTCC CAAAACCAAA AGGTCTCCGC 
1261 TGACTAGGGC ACATCTGACA GAAGTGGAAT CAAGGCTAGA AAGACTGGAA CAGCTATTTC 
1321 TACTGATTTT TCCTCGAGAA GACCTTGACA TGATTTTGAA AATGGATTCT TTACAGGATA 
1381 TAAAAGCATT GTTAACAGGA TTATTTGTAC AAGATAATGT GAATAAAGAT GCCGTCACAG 
1441 ATAGATTGGC TTCAGTGGAG ACTGATATGC CTCTAACATT GAGACAGCAT AGAATAAGTG 
1501 CGACATCATC ATCGGAAGAG AGTAGTAACA AAGGTCAAAG ACAGTTGACT GTATCGCCGG 
1561 AATTCCCGGG GATCCGTCGA CTTGACGCGT TGATATCATC TAGAGCGGCC GCAGGTACCT 
1621 GAATAACTAA GGCCGCTTCC CTTTAGTGAG GGTTAATGCT TCGAGCAGAC ATGATAAGAT 
1681 ACATTGATGA GTTTGGACAA ACCACAACTA GAATGCAGTG AAAAAAATGC TTTATTTGTG 
1741 AAATTTGTGA TGCTATTGCT TTATTTGTAA CCATTATAAG CTGCAATAAA CAAGTTAACA 
1801 ACAACAATTG CATTCATTTT ATGTTTCAGG TTCAGGGGGA GATGTGGGAG GTTTTTTAAA 
1861 GCAAGTAAAA CCTCTACAAA TGTGGTAAAA TCCGATAAGG ATCGATCCGG GCTGGCGTAA 
1921 TAGCGAAGAG GCCCGCACCG ATCGCCCTTC CCAACAGTTG CGCAGCCTGA ATGGCGAATG 
1981 GACGCGCCCT GTAGCGGCGC ATTAAGCGCG GCGGGTGTGG TGGTTACGCG CAGCGTGACC 
2041 GCTACACTTG CCAGCGCCCT AGCGCCCGCT CCTTTCGCTT TCTTCCCTTC CTTTCACGCC 
2101 ACGTTCGCCG GCTTTCCCCG TCAAGCTCTA AATCGGGGGC TCCCTTTAGG GTTCCGATTT 
2161 AGTGCTTTAC GGCACCTCGA CCCCAAAAAA CTTGATTAGG GTGATGGTTC ACGTAGTGGG 
2221 CCATCGCCCT GATAGACGGT TTTTCGCCCT TTGACGTTGG AGTCCACGTT CTTTAATAGT 
2281 GGACTCTTGT TCCAAACTGG AACAACACTC AACCCTATCT CGGTCTATTC TTTTGATTTA 
2341 TAAGGGATTT TGCCGATTTC GGCCTATTGG TTAAAAAATG AGCTGATTTA ACAAAAATTT 
2401 AACGCGAATT TTAACAAAAT ATTAACGCTT ACAATTTCCT GATGCGGTAT TTTCTCCTTA 
2461 CGCATCTGTG CGGTATTTCA CACCGCATAC GCGGATCTTC CGTACCTTCT GAGGCGGAAA 
2521 GAACCAGCTG TGGAATGTGT GTCAGTTAGG GTGTGGAAAG TCCCCAGGCT CCCCAGCAGG 
2581 CAGAAGTATG CAAAGCATGC ATCTCAATTA GTCAGCAACC AGGTGTGGAA AGTCCCCAGG 
2641 CTCCCCAGCA GGCAGAAGTA TGCAAAGCAT GCATCTCAAT TAGTCAGCAA CCATAGTCCC 
2701 GCCCCTAACT CCGCCCATCC CGCCCCTAAC TCCGCCCAGT TCCGCCCATT CTCCGCCCCA 
2761 TGGCTGACTA ATTTTTTTTA TTTATGCAGA GGCCGAGGCC GCCTCGGCCT CTGAGCTATT 
2821 CCAGAAGTAG TGAGGAGGCT TTTTTGGAGG CCTAGGCTTT TGCAAAAAGC TTGATTCTTC 
2881 TGACACAACA GTCTCGAACT TAAGGCTAGA ATTCTGGCTA CAGGTAAGCG CCCCTAAAAT 
2941 CCCTTTGGGC ACAATGTGTC CTGAGGGGAG AGGCAGCGAC CTGTAGATGG GACGGGGGCA 
3001 CTAACCCTCA GGTTTGGGGC TTCTGAATGT GAGTATCGCC ATGTAAGCCC AGTATTTGGC 
3061 CAATCTCAGA AAGCTCCTGG TCCCTGGAGG GATGGAGAGA GAAAAACAAA CAGCTCCTGG 
3121 AGCAGGGAGA GTGCTGGCCT CTTGCTCTCC GGCTCCCTCT GTTGCCCTCT GGTTTCTCCC 
3181 CAGGCTCCCG GACGTCCTCT AGCCACCATG ACTTCGAAAG TTTATGATCC AGAACAAAGG 
3241 AAACGGATGA TAACTGGTCC GCAGTGGTGG GCCAGATGTA AACAAATGAA TGTTCTTGAT 
3301 TCATTTATTA ATTATTATGA TTCAGAAAAA CATGCAGAAA ATGCTGTTAT TTTTTTACAT 
3361 GGTAACGCGG CCTCTTCTTA TTTATGGCGA CATGTTGTGC CACATATTGA GCCAGTAGCG 
3421 CGGTGTATTA TACCAGACCT TATTGGTATG GGCAAATCAG GCAAATCTGG TAATGGTTCT 
3481 TATAGGTTAC TTGATCATTA CAAATATCTT ACTGCATGGT TTGAACTTCT TAATTTACCA 
3541 AAGAAGATCA TTTTTGTCGG CCATGATTGG GGTGCTTGTT TGGCATTTCA TTATAGCTAT 
3601 GAGCATCAAG ATAAGATCAA AGCAATAGTT CACGCTGAAA GTGTAGTAGA TGTGATTGAA 
3661 TCATGGGATG AATGGCCTGA TATTGAAGAA GATATTGCGT TGATCAAATC TGAAGAAGGA 
3721 GAAAAAATGG TTTTGGAGAA TAACTTCTTC GTGGAAACCA TGTTGCCATC AAAAATCATG 
3781 AGAAAGTTAG AACCAGAAGA ATTTGCAGCA TATCTTGAAC CATTCAAAGA GAAAGGTGAA 
3841 GTTCGTCGTC CAACATTATC ATGGCCTCGT GAAATCCCGT TAGTAAAAGG TGGTAAACCT 
3901 GACGTTGTAC AAATTGTTAG GAATTATAAT GCTTATCTAC GTGCAAGTGA TGATTTACCA 
3961 AAAATGTTTA TTGAATCGGA CCCAGGATTC TTTTCCAATG CTATTGTTGA AGGTGCCAAG 
4021 AAGTTTCCTA ATACTGAATT TGTCAAAGTA AAAGGTCTTC ATTTTTCGCA AGAAGATGCA 
4081 CCTGATGAAA TGGGAAAATA TATCAAATCG TTCGTTGAGC GAGTTCTCAA AAATGAACAA 
4141 TAATTCTAGC CCTGAATAAG TGATAATAAG CGGATGAATG GCAGAAATTC GTCGAAGCGC 
4201 AATAAAATAT CTTTATTTTC ATTACATCTG TGTGTTGGTT TTTTGTGTGA ATCGATAGCG 
4261 ATAAGGATCG GAAGATCCGC GTATGGTGCA CTCTCAGTAC AATCTGCTCT GATGCCGCAT 
4321 AGTTAAGCCA GCCCCGACAC CCGCCAACAC CCGCTGACGC GCCCTGACGG GCTTGTCTGC 
4381 TCCCGGCATC CGCTTACAGA CAAGCTGTGA CCGTCTCCGG GAGCTGCATG TGTCAGAGGT 
4441 TTTCACCGTC ATCACCGAAA CGCGCGAGAC GAAAGGGCCT CGTGATACGC CTATTTTTAT 
4501 AGGTTAATGT CATGATAATA ATGGTTTCTT AGACGTCAGG TGGCACTTTT CGGGGAAATG 
4561 TGCGCGGAAC CCCTATTTGT TTATTTTTCT AAATACATTC AAATATGTAT CCGCTCATGA 
4621 GACAATAACC CTGATAAATG CTTCAATAAT ATTGAAAAAG GAAGAGTATG AGTATTCAAC 
4681 ATTTCCGTGT CGCCCTTATT CCCTTTTTTG CGGCATTTTG CCTTCCTGTT TTTGCTCACC 
4741 CAGAAACGCT GGTGAAAGTA AAAGATGCTG AAGATCAGTT GGGTGCACGA GTGGGTTACA 
4801 TCGAACTGGA TCTCAACAGC GGTAAGATCC TTGAGAGTTT TCGCCCCGAA GAACGTTTTC 
4861 CAATGATGAG CACTTTTAAA GTTCTGCTAT GTGGCGCGGT ATTATCCCGT GTTGACGCCG 
4921 GGCAAGAGCA ACTCGGTCGC CGCATACACT ATTCTCAGAA TGACTTGGTT GAGTACTCAC 
4981 CAGTCACAGA AAAGCATCTT ACGGATGGCA TGACAGTAAG AGAATTATGC AGTGCTGCCA 
5041 TAACCATGAG TGATAACACT GCGGCCAACT TACTTCTGAC AACGATCGGA GGACCGAAGG 
5101 AGCTAACCGC TTTTTTGCAC AACATGGGGG ATCATGTAAC TCGCCTTGAT CGTTGGGAAC 
5161 CGGAGCTGAA TGAAGCCATA CCAAACGACG AGCGTGACAC CACGATGCCT GTAGCAATGG 
5221 CAACAACGTT GCGCAAACTA TTAACTGGCG AACTACTTAC TCTAGCTTCC CGGCAACAAT 
5281 TAATAGACTG GATGGAGGCG GATAAAGTTG CAGGACCACT TCTGCGCTCG GCCCTTCCGG 
5341 CTGGCTGGTT TATTGCTGAT AAATCTGGAG CCGGTGAGCG TGGGTCTCGC GGTATCATTG 
5401 CAGCACTGGG GCCAGATGGT AAGCCCTCCC GTATCGTAGT TATCTACACG ACGGGGAGTC 
5461 AGGCAACTAT GGATGAACGA AATAGACAGA TCGCTGAGAT AGGTGCCTCA CTGATTAAGC 
5521 ATTGGTAACT GTCAGACCAA GTTTACTCAT ATATACTTTA GATTGATTTA AAACTTCATT 
5581 TTTAATTTAA AAGGATCTAG GTGAAGATCC TTTTTGATAA TCTCATGACC AAAATCCCTT 
5641 AACGTGAGTT TTCGTTCCAC TGAGCGTCAG ACCCCGTAGA AAAGATCAAA GGATCTTCTT 
5701 GAGATCCTTT TTTTCTGCGC GTAATCTGCT GCTTGCAAAC AAAAAAACCA CCGCTACCAG 
5761 CGGTGGTTTG TTTGCCGGAT CAAGAGCTAC CAACTCTTTT TCCGAAGGTA ACTGGCTTCA 
5821 GCAGAGCGCA GATACCAAAT ACTGTTCTTC TAGTGTAGCC GTAGTTAGGC CACCACTTCA 
5881 AGAACTCTGT AGCACCGCCT ACATACCTCG CTCTGCTAAT CCTGTTACCA GTGGCTGCTG 
5941 CCAGTGGCGA TAAGTCGTGT CTTACCGGGT TGGACTCAAG ACGATAGTTA CCGGATAAGG 
6001 CGCAGCGGTC GGGCTGAACG GGGGGTTCGT GCACACAGCC CAGCTTGGAG CGAACGACCT 
6061 ACACCGAACT GAGATACCTA CAGCGTGAGC TATGAGAAAG CGCCACGCTT CCCGAAGGGA 
6121 GAAAGGCGGA CAGGTATCCG GTAAGCGGCA GGGTCGGAAC AGGAGAGCGC ACGAGGGAGC 
6181 TTCCAGGGGG AAACGCCTGG TATCTTTATA GTCCTGTCGG GTTTCGCCAC CTCTGACTTG 
6241 AGCGTCGATT TTTGTGATGC TCGTCAGGGG GGCGGAGCCT ATGGAAAAAC GCCAGCAACG 
6301 CGGCCTTTTT ACGGTTCCTG GCCTTTTGCT GGCCTTTTGC TCACATGGCT CGACAGATCT