pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST实际上是一个双表达框载体，PGK启动子带一个EmGFP荧光标记基因，CMV启动子调控外源基因的表达。不过，外源基因插入CMV启动子后，只能用LR重组的方法实现，所以，外源基因需要先构建至Entry载体上，例如pENTR/D-TOPO等。
pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST空载上，CMV启动子后有ccdB表达框，所以此载体只能在DB3.1等专用的大肠杆菌中才能复制扩增，使用此载体时，请注意配套相应的DB3.1感受态。当外源基因成功插入，ccdB表达框将被置换掉，此时，重组质粒可以在DH5α等常规大肠杆菌中复制扩增。