产品名称：质粒小提中量试剂盒(AXYBIO Mini-prep Mid-range Plasmid Kit)
目录号：AXY102
规格：50次（AXY102-1）
一、产品组成
| 名称 | AXY102-1 |
| 溶液 P1 (Buffer P1) | 25ml |
| 溶液 P2 (Buffer P2) | 25ml |
| 溶液 P3 (Buffer P3) | 35ml |
| 洗涤液PW(Buffer PW) | 23ml |
| 洗脱缓冲液EB (Buffer EB) | 15ml |
| RNaseA(10mg/ml) | 300μl/支 |
| 吸附柱和收集管 | 50套 |
二、试剂盒简介
本试剂盒采用改进的 SDS 碱裂解法，结合 DNA 制备膜选择性地吸附 DNA 的方法达到快速纯化质粒 DNA 的目的。适合于从 5-15ml 细菌培养物中提取多至 80μg 高纯的质粒 DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
三、储存条件
室温（15–25℃）干燥保存：12个月
2–8℃保存：更长；若有沉淀，37℃预热10min溶解
RNaseA：加入P1后2–8℃保存，稳定6个月
四、使用前准备
1. RNaseA处理：首次使用前，将全部RNaseA加入溶液P1，混匀，2–8℃保存。
2. 漂洗液PW：使用前按瓶标体积加入无水乙醇，混匀，室温可保存6个月。
五、操作步骤（标准流程）
1. 菌体收集：取5–15ml过夜培养菌液，12,000rpm，1min，弃上清。
2. 菌体重悬：加500μl溶液P1（含RNaseA），充分振荡重悬，无块状。
3. 菌体裂解：加500μl溶液P2，温和颠倒6–8次混匀，室温静置2–5min。液体变清亮黏稠即裂解完全；不要超过5min。
4.中和沉淀：加700μl溶液P3，立即温和颠倒6–8次，出现白色絮状沉淀。12,000rpm，10min，取上清。
5. 质粒结合：将上一步骤离心后的上清分两次(每次800微升)吸入到吸附柱（吸附柱套在收集管上）内。12,000rpm，1min，弃废液，柱放回收集管。
6. 漂洗（2次）：加600μl漂洗液PW（已加乙醇）。12,000rpm，1min，弃废液。重复一次漂洗。
7. 空柱离心：吸附柱放回收集管，12,000rpm，2min，彻底去除残留乙醇。
8. 洗脱：吸附柱放入干净1.5ml离心管。膜中央加50–100μl洗脱缓冲液EB（预热至65℃效果更好）。室温静置2min。12,000rpm，2min，收集质粒DNA。
六、得率与纯度
高拷贝质粒（如pUC系列）：5–15ml菌液→15–70μg
低拷贝质粒（如pACYC系列）：5–15ml菌液→5–25μg
OD260/280：约1.8–2.0，纯度高
适用：酶切、PCR、测序、连接、转化、普通细胞转染
七、常见问题与解决
得率低：菌体过少/培养不足
裂解不充分：P1未重悬、P2作用不足
洗脱体积太小、未充分静置
漂洗液未加乙醇
纯度差（OD低/有杂带）菌体过多，裂解不彻底
P3加入后未立即混匀
漂洗不充分
洗脱前空离心不足
八、注意事项
所有离心步骤均在室温进行。
溶液P2、P3避免剧烈振荡，防止基因组DNA污染。
吸附柱避免接触液体外沿，防止污染。漂洗液PW，使用前请加入88毫升95%的乙醇。