流式细胞术检测服务

服务价格及周期

服务项目

样品外理

应用的试剂

收费

细胞周期

细胞-胰酶消化-PBS洗-70%乙醇-4℃固定过夜(不超过一周)

RNA酶,PI 染料

<10个样品:120元/个;
>10个样品:100元/个;
试剂费已包括,最低1000元起。

细胞凋亡

新鲜培养的细胞

Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒

<10个样品:120元/样品;
>10个样品:100元/样品;
已包括试剂费用,客户提供试剂可减20元另需细胞培养费用。

免疫细胞分型

培养的细胞:如白血病细胞,客户刺激好的细胞、抗凝全血、脾匀浆

破膜剂,固定剂,刺激剂、特异性抗体(需客户提供)

双染:<10个样品,120元/样品;
>10个样品,100元/样品;
三染:双染+50元;
需要细胞分离、细胞处理的具体协商

表面抗原鉴定

培养的细胞

特异性抗体(需客户提供)

单染:<10个样品,100元/样品;
>10个样品,80元/样品;
双染:单染 + 40元; 三染:双染 + 40元

胞内钙离子检测

培养的细胞

Fluo-3 AM(钙离子荧光探针)

<10个样品,100元/样
>10个样品,80元/样品(已包含试剂)

线粒体功能

仅适用于悬浮或贴壁培养的新鲜细胞

客户提供试剂盒

检测费用同细胞周期

细胞分选

收费:标记费用+分选仪使用费用 价格体系类似于共聚焦

1、检测项目:
(1)细胞周期细胞;(2)细胞凋亡;(3)免疫细胞分型;(4)表面抗原鉴定;(5)细胞内钙离子检测;(6)线粒体功能;(7)细胞分选。
2、样本及来源:
1) 单个细胞:1~2×106 个细胞左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
说明:
1、实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL等。
2、送检样本量:
1)、单个细胞:1~2×106 个细胞左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)、外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约,同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个,每个测试费用为标准收费×2。
4、我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
5、用户须一次性全额预付实验费。
6、部分常用荧光探针,如PI等,我公司可免费提供;特殊标记物,如CD抗体等,用户须另行购买,也可委托我公司代购;用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
7、由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
8、请在表中说明检测具体要求(可另附页),由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。
9、请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息,样品检测后原则上本公司不负责保存。
客户提供:
(1)标本:组织、细胞、全血(抗凝)
(2)抗体(荧光素标记)
PE最强,适用于弱表达抗原
FITC最便宜,适用于强表达抗原,适用范围广
biotin-avidin不适合 弱抗原的检测
(3)其他试剂(如Fluo-3)
(4)染色试剂盒
流式细胞术检测样品推荐制备方法
A. 直接标记抗体(FITC标记抗体):
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1) 收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2) 用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3) 用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4) 加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5) 加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6) 加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7) 流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1) 待测样本制成单细胞悬液,然后2000转/分离心5分钟,弃上清。
(2) 用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存,至少固定18小时。
(3) 调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4) PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
注:本方法仅供参考,如有其它要求,请在送样前说明。

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